在植物中,水楊酸(SA)作為一種重要的內(nèi)源激素調(diào)控植物的抗病、抗逆、生長發(fā)育和衰老。其代謝機(jī)理是SA研究的重要內(nèi)容之一。在擬南芥中,SA合成和分解代謝路徑尚未被闡述清楚。為了深入揭示水楊酸代謝的分子機(jī)制及生理功能,本文利用EMS誘變因SA積累而變小的擬南芥雙突變體s3h*s5h,篩選表型恢復(fù)變大的突變體,用正向遺傳學(xué)方法克隆SA代謝相關(guān)基因。同時通過生物信息學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)等研究方法研究一個水楊酸羥基化代謝候選基因At4g10490(DLO2)的生理學(xué)功能。取得的具體研究結(jié)果如下:(1)本文利用一種依賴于水楊酸突變體表型篩選水楊酸相關(guān)突變體的方法,對EMS誘變的水楊酸積累的擬南芥雙突變體Col-O s3*s5h進(jìn)行篩選,篩選出表型恢復(fù)變大的突變體,建立表型恢復(fù)突變體庫。對己篩選出的突變體進(jìn)行表型、直徑及水楊酸代謝水平進(jìn)行統(tǒng)計。本文己篩選出20個與水楊酸代謝及葉片衰老相關(guān)的突變體,并根據(jù)其表型及水楊酸代謝水平分為四類,分別為:Ⅰ表型恢復(fù)變大且葉片晚衰,SA含量降低的突變體;Ⅱ表型恢復(fù)變大且葉片晚衰,SA含量與雙突變體s3h*s5h相似的突變體;Ⅲ表型恢復(fù)變大且葉片早衰,S...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．２?Ｍ２代突變體表型??Ｆｉｇ?２．２?ｔｈｅ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｏｆ?Ｍ２?ｍｕｔａｎｔｓ??

位于ＳＡ誘導(dǎo)早衰的信號通路中，那么該基因突變會抑制早衰的表型。因此我們??采用甲基磺酸乙脂（ＥＭＳ）化學(xué)誘變方法，對葉片嚴(yán)重早衰的擬南芥Ｈ／？七５／；雙突變體??進(jìn)行誘變，觀察Ｍ２代植株發(fā)育表型（如圖２．２所示），其中葉片變大和（或）抑制早衰??的突變體即為ＳＡ相關(guān)突變體。根據(jù)此....

圖２．４葉片變大、晚衰且ＳＡ含量降低的突變體的表型分析??Ａ，２１天ＷＴ、與突變體的表型對比；Ｂ，?２１天ＷＴ、與突變體的直徑對比

??圖２．３．葉片變大和（或）抑制早衰的突變體表型??Ｆｉｇ?２．３?Ｔｈｅ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｏｆ?ｌｅａｆ?ｍｏｒｐｈｉｎｇ?ａｎｄ／ｏｒ?ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ?ｐｒｅｍａｔｕｒｅ?ａｇｉｎｇ?ｍｕｔａｎｔｓ??２．２．１葉片變大、晚衰且ＳＡ含量降低的突變體??在篩選得到....

圖２．６葉片變大、早衰且ＳＡ含量未變的突變體的表型和代謝分析??Ａ，２１天與突變體的表型對比；Ｂ，?２１天ＷＴ、ｄ／ｉｈ５Ａ與突變體的直徑對比；Ｃ，??２１天ＷＴ、■ｄＰｄ／；與突變體的水楊酸代謝分析對比

＾?＾°°８＾§§§§§２§８§§２８??—ｘ〇Ｔ５—？－ｒ〇Ｃ？Ｋ５－＾．ａ）ｈ〇ＣＯ－Ｐ＾ＣＤ—??圖２．５葉片變大、晚衰且ＳＡ含量降低的突變體的代謝分析??Ｆｉｇ?２．５?Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｍｕｔａｎｔｓ?ｗｉｔｈ?ｌａｒｇｅ?ｌｅａｆ，?ｌａｔｅ....

圖２．９雜交ＦＩ代表型及代謝分析??Ａ，雜交后Ｆ］代表型分析：Ｂ，雜交Ｆ１代代謝分析

ＡｔＵ６－２６＿ｓｇＲＮＡ－ＳＫ基因片段進(jìn)行連接、轉(zhuǎn)化，然后按照Ｉ．５．１．２?（７）方法進(jìn)行菌落??ＰＣＲ驗證，并挑選陽性克隆搖菌提取質(zhì)粒，按照１．５．１．２?（８）方法對所提質(zhì)粒進(jìn)行酶切驗??證。如圖２．１０Ａ所示，菌落ＰＣＲ產(chǎn)物電泳條帶大小為４９９?ｂｐ，與預(yù)期大小一致。其....

本文編號：3992959