目的:探討在胃癌腹膜侵襲轉(zhuǎn)移中,與PRL-3啟動子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子TFEB對PRL-3的調(diào)控作用,從而在基因的轉(zhuǎn)錄層面,明確PRL-3在胃癌中高表達的分子機制。方法:首先,通過生物信息學等方法,分析了PRL-3的轉(zhuǎn)錄本及啟動子情況,再通過預測PRL-3啟動子區(qū)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點,獲得目標轉(zhuǎn)錄因子TFEB。進而構(gòu)建了轉(zhuǎn)錄因子TFEB的pcDNA3.1的表達重組體。其次,利用單熒光素酶報告技術(shù)、雙熒光素酶報告技術(shù)、過表達以及siRNA干擾技術(shù),來研究轉(zhuǎn)錄因子TFEB對PRL-3啟動子的調(diào)控作用。再利用染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)方法研究轉(zhuǎn)錄因子TFEB與PRL-3啟動子區(qū)域的結(jié)合情況,以證實轉(zhuǎn)錄因子TFEB對PRL-3啟動子具有調(diào)控作用。結(jié)果:PRL-3具有多個轉(zhuǎn)錄本,啟動子區(qū)主要在2個區(qū)域,第一外顯子上游啟動子區(qū)和第一內(nèi)含子內(nèi)啟動子區(qū)。第一外顯子上游啟動子比第一內(nèi)含子內(nèi)啟動子活性高很多,第一外顯子上游啟動子的核心區(qū)域為-1bp^-445 bp。轉(zhuǎn)錄因子TFEB對PRL-3第一外顯子上游啟動子有正向調(diào)控作用,且與PRL-3第一外顯子上游啟動子的核心區(qū)域有直接結(jié)合,結(jié)合位點...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-3pcDNA3.1（+）Vector(2)pcDNA3.1（+）-TFEB重組質(zhì)粒,由上海吉凱生物技術(shù)有限公司構(gòu)建完成

4圖2-3pcDNA3.1（+）Vector(2)pcDNA3.1（+）-TFEB重組質(zhì)粒,由上海吉凱生物技術(shù)有限公司構(gòu)建3）pGL3-PRL-3-promoter,pGL34.10-PRL-3-promoter重組體由上海有限公司構(gòu)建及保存。4）宿主菌E.col....

圖3-1PRL-3轉(zhuǎn)錄本情況

第3章結(jié)果第3章結(jié)果3.1PRL-3轉(zhuǎn)錄本及啟動子情況分析通過Ensemblgenomebrowser95（http://www.ensembl.org/index.html）發(fā)現(xiàn)PRL-3（PTP4A3）存在4個蛋白質(zhì)亞型（173aa，148aa，87aa....

圖3-2PRL-3啟動子情況

第3章結(jié)果3.1PRL-3轉(zhuǎn)錄本及啟動子情況分析通過Ensemblgenomebrowser95（http://www.ensembl.org/index.html）發(fā)現(xiàn)PRL-3（PTP4A3）存在4個蛋白質(zhì)亞型（173aa，148aa，87aa，70aa），具....

圖3-3胃癌SGC-7901細胞中PRL-3啟動子活性分析

以海腎熒光素酶作為轉(zhuǎn)染效率控制的內(nèi)對照，再分別測定雙熒光素酶活性，結(jié)果如圖3-3。研究發(fā)現(xiàn)，第一外顯子上游啟動子活性比第一內(nèi)含子內(nèi)啟動子活性要高的多。第一外顯子上游啟動子不同截短體的活性分析如圖3-4，發(fā)現(xiàn)-1bp~-445bp截短體的啟動子活性明顯增強，所以研究確定了第....

本文編號：3981242