家蠶(Bombyx mori)不僅是一種重要的經(jīng)濟昆蟲,也是一種重要的模式昆蟲,在昆蟲的生理、發(fā)育、遺傳和免疫調(diào)控等科學研究領域發(fā)揮著重要作用。在蠶業(yè)生產(chǎn)中,病原微生物的入侵常常給養(yǎng)蠶業(yè)帶來極大的損失;其中,球孢白僵菌(Beauveria bassiana)因其致病力強、易傳染、宿主范圍廣等特點成為對蠶業(yè)生產(chǎn)危害最嚴重的一種病原真菌。本研究小組前期通過數(shù)字基因表達譜技術(shù)篩選了家蠶在感染球孢白僵菌后的差異表達基因,發(fā)現(xiàn)家蠶感染球孢白僵菌后家蠶貯存蛋白(storage protein,SP)基因的表達水平顯著上調(diào)。因此推斷貯存蛋白在家蠶應對球孢白僵菌侵染的過程中發(fā)揮著重要的生理生化作用及一定的抗真菌作用。本研究成功表達了家蠶貯存蛋白Bm30K-19G1,分別研究貯存蛋白在家蠶體內(nèi)體外對球孢白僵菌孢子以及菌絲的抑制作用;并且通過桿狀病毒表達系統(tǒng)表達了家蠶貯存蛋白BmSP1,研究其對球孢白僵菌的抑菌作用和在家蠶血淋巴中的抗黑化反應,并且進一步篩選獲得了BmSP1的互作蛋白。得到的主要結(jié)果如下:1.家蠶貯存蛋白Bm30K-19G1對球孢白僵菌具有一定的抗真菌作用家蠶貯存蛋白Bm30K-19G1是...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 家蠶及球孢白僵菌的研究
    1.2 昆蟲貯存蛋白的研究
    1.3 本課題研究目的及意義
    1.4 本課題主要研究內(nèi)容與研究方法
        1.4.1 主要研究內(nèi)容
        1.4.2 實驗技術(shù)路線
第2章 家蠶貯存蛋白Bm30K-19G1 的表達及純化
    2.1 引言
    2.2 實驗材料與試劑
        2.2.1 主要實驗材料
        2.2.2 主要儀器與設備
        2.2.3 主要試劑
        2.2.4 主要試劑的配制
        2.2.5 常用生物信息學軟件及網(wǎng)址
    2.3 實驗材料與方法
        2.3.1 供試家蠶
        2.3.2 家蠶組織的收集
        2.3.3 家蠶貯存蛋白Bm30K-19G1 基因的克隆
        2.3.4 Bm30K-19G1 的組織特異表達譜
        2.3.5 重組蛋白Bm30K-19G1 的表達與純化
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 Bm30K-19G1 基因的克隆以及表達載體的構(gòu)建
        2.4.2 Bm30K-19G1 的組織特異表達譜
        2.4.3 Bm30K-19G1 重組蛋白的表達與鑒定
    2.5 本章討論
第3章 家蠶貯存蛋白Bm30K-19G1 對球孢白僵菌的抑制作用
    3.1 引言
    3.2 實驗材料與試劑
        3.2.1 主要實驗材料
        3.2.2 主要儀器與設備
        3.2.3 主要試劑與配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 Bm30K-19G1 對球孢白僵菌孢子以及菌絲的抑制作用
        3.3.2 抑菌圈試驗
        3.3.3 家蠶體內(nèi)抑菌試驗
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 重組蛋白Bm30K-19G1 對液體培養(yǎng)球孢白僵菌的抑制作用
        3.4.2 Bm30K-19G1 對球孢白僵菌的抑菌圈試驗
        3.4.3 Bm30K-19G1 對家蠶體內(nèi)球孢白僵菌的抑菌作用
    3.5 本章討論
第4章 家蠶貯存蛋白BmSP1 的表達分析
    4.1 引言
    4.2 實驗材料與試劑
        4.2.1 主要實驗材料
        4.2.2 主要儀器與設備
        4.2.3 主要試劑與配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 家蠶組織的收集
        4.3.2 BmSP1 基因的克隆與生物信息學分析
        4.3.3 BmSP1 的表達譜
        4.3.4 重組表達載體p Fast Bac1-EGFP-SP1 的構(gòu)建
        4.3.5 BmSP1 重組蛋白的驗證
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 BmSP1 基因的克隆與生物信息學分析
        4.4.2 BmSP1 的表達譜
        4.4.3 BmSP1 重組表達載體的構(gòu)建
        4.4.4 重組蛋白的驗證
    4.5 本章討論
第5章 家蠶貯存蛋白BmSP1 互作蛋白的篩選與鑒定
    5.1 引言
    5.2 實驗材料與試劑
        5.2.1 主要實驗材料
        5.2.2 主要儀器與設備
        5.2.3 主要試劑與配制
    5.3 試驗方法
        5.3.1 重組蛋白BmSP1 對白僵菌的抑菌作用
        5.3.2 BmSP1 在家蠶體內(nèi)的過表達及其抗黑化反應
        5.3.3 BmSP1 互作蛋白的篩選
        5.3.4 BmSP1與BmLP6 的相互作用驗證
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 BmSP1 在家蠶體內(nèi)的過表達
        5.4.2 重組蛋白BmSP1 對白僵菌的抑菌作用
        5.4.3 BmSP1 的抗黑化反應
        5.4.4 BmSP1 互作蛋白的篩選
        5.4.5 BmSP1與BmLP6 的相互作用驗證
    5.5 本章討論
第六章 全文結(jié)論與展望
參考文獻
附錄
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文
致謝
資助項目



本文編號：3967846