Hfq(Host factor of the RNA bacteriophage Qβ,簡(jiǎn)稱 Hfq)是細(xì)菌中普遍存在的全局調(diào)控因子,作為RNA分子伴侶,通過介導(dǎo)小RNA和信使RNA(sRNA-mRNA)的堿基配對(duì)影響其靶向轉(zhuǎn)錄物的翻譯速率和壽命,涉及細(xì)菌的生長(zhǎng)增殖、毒性和逆境耐受等多種生理生化過程。滯留菌指在遺傳信息不發(fā)生改變的情況下逃避抗生素殺菌作用的細(xì)菌細(xì)胞。與耐藥菌不同,滯留菌是一種處于休眠狀態(tài)的表型變異細(xì)胞,幾乎停止所有的生命活動(dòng),幾乎對(duì)所有藥物耐受。Hfq對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的重要性,推測(cè)其可能與滯留形成相關(guān)。Hfq相關(guān)的研究報(bào)道眾多,但其在維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)中的研究尚未發(fā)現(xiàn),且Hfq關(guān)聯(lián)滯留菌形成的實(shí)驗(yàn)只有大腸桿菌(Escherichia coli)背景下的少數(shù)案例報(bào)道。本論文基于維氏氣單胞菌C4為背景,根據(jù)同源重組原理,構(gòu)建維氏氣單胞菌hfq突變株C4-Δhfq,并從轉(zhuǎn)錄水平證明敲除成功;接著檢測(cè)C4-Δhfq的生長(zhǎng)曲線及9種抗生素藥物的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度(MC/MBC)。實(shí)驗(yàn)表明,hfq基因敲除顯著延緩維氏氣單胞菌的生長(zhǎng)速率,并且敲除菌表...

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?Ｈｆｑ的結(jié)構(gòu)及其與ＲＮＡ的作用??（Ｊｏｒｇ?Ｖｏｇｅｌ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１５；?Ｔａｙｌｏｒ?Ｂ．?Ｕｐｄｅｇｒｏｖｅ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１６）??：Ａ：?Ｈｆ二ＳｍｌＳｍ２Ｂ：?Ｈｆ

ｍａｒｋｅｄ?ｉｎ?ｇｒｅｅｎ；?Ｄ：?Ａ?ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＲＮＡ?（ｏｒａｎｇｅ）?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｐｒｏｘｉｍａｌ?ｆａｃｅ??ｏｆ?Ｈｆｑ?ｌｏｏｐ；?Ｅ：?Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏ....

圖２維氏氣單胞菌物基因同源敲除原理??Ｆｉｇ，?２?Ｔｈｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｓｈｏｗｉｎｇ?ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ?ｋｎｏｃｋｏｕｔ?ｏｆ?ｈｆｑ?ｇｅｎｅ?ｉｎ?Ａ，?ｖｅｒｏｎｉｉ??

的序列設(shè)計(jì)同源片段，構(gòu)建／？為基因敲除載體。當(dāng)外源ＤＮＡ導(dǎo)入受體細(xì)胞后，??序列相似基因在受體細(xì)胞內(nèi)發(fā)生同源重組，相似片段整合至受體細(xì)胞基因組中，??從而達(dá)到基因敲除的目的。如圖２所示為按同源雙交換敲除原理設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)策略??簡(jiǎn)圖。??響辦賄?「……Ｖ?Ｋ?…Ｘ……一?：??５域交....

圖４敲除質(zhì)粒ＰＲＥ１１２－Ａ響的菌落ＰＣＲ鑒定??注：Ｍ：?ＤＬ５０００?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１：敲除質(zhì)粒ｐＲＥｌ?１２－Ａ／？＾的陽性轉(zhuǎn)化子；２：維氏氣單胞菌??

２０００ｂｐ??２５０ｂｐ??ｉｏ〇ｂｐ－＾＾Ｈ??■■■■■■■■■??３峋基因上，下游同源臂片段ＰＣＲ擴(kuò)?ｍａｒｋｅｒ；?１：上游同源臂ＰＣＲ產(chǎn)物Ｕｐ－產(chǎn)物Ｄｏｗｎ??ｓ?ｏｆ?ｕｐｓｔｒｅａｍ?ａｎｄ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ｈｏｍｏｌｏｇｏＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ?....

圖３峋基因上，下游同源臂片段ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物??注：Ｍ：?ＤＬ５０００?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１：上游同源臂ＰＣＲ產(chǎn)物Ｕｐ－物；２：物下游同源臂ＰＣＲ??

圖３峋基因上，下游同源臂片段ＰＣＲ擴(kuò)Ａ?ｍａｒｋｅｒ；?１：上游同源臂ＰＣＲ產(chǎn)物Ｕｐ－產(chǎn)物Ｄｏｗｎ??ｃｔｓ?ｏｆ?ｕｐｓｔｒｅａｍ?ａｎｄ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ｈｏｍｏｌｏｇｏｕＮＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｕｐｓｔｒｅａｍ?ｈｏｍｐｒｏｄｕｃｔ....

本文編號(hào)：3962841