通過CRISPR/Cas系統來構建miR-17-92基因簇的雙切載體,研究結果表明:在miR-17-92基因簇的序列上找到了2個PAM(TGG和GGG)位點,從而得到了2個原間隔序列,設計合成基因簇雙鏈crRNA;合成該片段并將其插入到p X260載體,使得在同一個載體上雖然只有一個g-RNA,但能夠同時切割兩個不同的靶位點;將該載體轉染NIH3T3細胞驗證切割效率,PCR結果和測序結果顯示,所構建的CRISPR系統可以對基因片段進行有效切割。

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【文章目錄】：
1材料與方法
    1.1 crRNA序列的設計
    1.2質粒載體的構建
    1.3 miR-17-92基因簇雙切載體切割效率檢測
2結果與分析
    2.1 crRNA序列的設計
    2.2 CRISPR/Cas系統miR-17-92基因簇雙切載體的構建
    2.3 miR-17-92基因簇雙切載體的檢測
        2.3.1 PCR檢測
        2.3.2灰度分析切割效率
        2.3.3測序分析
3結論與討論



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