虹鱒(Oncorhynchus mykiss)是一種在北方地區(qū)廣泛養(yǎng)殖的冷水性魚類,對高溫具有低耐受性和高敏感性,隨著虹鱒養(yǎng)殖業(yè)集約化、規(guī)�；陌l(fā)展,虹鱒在夏季面臨的生存考驗愈加嚴峻,很易因熱應激造成大面積死亡或減產(chǎn)。課題組前期通過高通量測序研究虹鱒熱應激前后(18℃和24℃)差異表達的miRNA時發(fā)現(xiàn),在虹鱒頭腎中存在兩個未知mi RNA,其在熱應激前后差異表達極顯著(^**P<0.01),分別暫命名為novel-434和novel-242(novel-434和novel-242均為測序所得novel miRNA數(shù)據(jù)庫中miRNA的排序)。通過miRNA靶基因預測軟件mi Randa對其靶基因進行預測分析,發(fā)現(xiàn)novel-434和novel-242分別負向調(diào)控重要的靶基因HSPA4L和CRT。鑒于此,本研究選擇HSPA4L作為novel-434待驗證的靶基因,CRT作為novel-242待驗證的靶基因,利用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)驗證其靶標關系,并通過GO注釋和KEGG分析其功能和調(diào)控機制。具體試驗結果及結論如下:1.成功克隆pmirGLO-HSPA4L 3’...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1novel-434與HSPA4LmRNA3'-UTR結合位點

圖2-1novel-434與HSPA4LmRNA3'-UTR結合位點Figure2-1Thebindingsitesofnovel-434withHSPA4LmRNA3'-UTR劃線部分為生物信息學預測的miRNA與靶基因3’UTR結合位點....

圖2-2novel-242與CRTmRNA3'-UTR結合位點

甘肅農(nóng)業(yè)大學2018屆碩士學位論文圖2-1novel-434與HSPA4LmRNA3'-UTR結合位點Figure2-1Thebindingsitesofnovel-434withHSPA4LmRNA3'-UTR線部分為生物信息學預測的miRN....

圖2-3載體克隆試驗原理

22min。12000r/min離心2min，收集DNA溶液（注：洗脫液體積不應小于30μ回收效率）。重復實驗步驟（8）。）將洗脫后的DNA產(chǎn)物保存在-20℃冰箱，便于后續(xù)實驗使用。性化pmirGLO載體與HSPA4L/CRT3'-UTR連接靶基....

圖2-4pmirGLO載體多克隆位點Figure2-4MultiplecloningsiteofpmirGLOvector

（9）吸去轉染液，加入100μL的DMEM（含10%FBS）培養(yǎng)液，37℃，5%培養(yǎng)，分別在24和48h觀察并拍照質粒轉染效果圖片。.2重組載體轉染pmirGLO載體主要用于檢測miRNA活性，試驗中將miRNA的靶mRNA序列pmirGLO....

本文編號：3941509