發(fā)布時間：2024-03-24 02:37

　　以野生型蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus) EN34為出發(fā)菌株,增強胱硫醚γ-合成酶基因(metI)表達,敲除或弱化腺苷蛋氨酸合成酶的編碼基因metK,分析這2個基因的改變對蛋氨酸產(chǎn)量的影響。從枯草芽孢桿菌基因組中擴增P43強啟動子,連接到pEB03質粒,利用重組連接的方法,將metI從Bacillus cereus EN34擴增重組連接到質粒,構建成pEB03-P43-SD-metI,通過電擊轉化到Bacillus cereus EN34,獲得Bacillus cereusEN34(pEB03-P43-SD-metI)菌株。通過Bacillus cereus EN34擴增metK基因,提取質粒pKVM1以及重組連接等方法,構建出pKVM 1::metK′敲除質粒,將質粒電轉化到Bacillus cereusEN34中進行metK交換,再篩選出單交換成功的菌株,最后獲得metK弱化成功Bacillus cereus EN34Δ(metK)菌株。經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)基硫源優(yōu)化分析得出,單獨增強metI表達不能提高蛋氨酸產(chǎn)量,產(chǎn)量與出發(fā)菌株基本一致;改變metK基因,能提高蛋氨酸產(chǎn)量,但...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
        1.1.1 菌株和質粒
        1.1.2 主要試劑和儀器
        1.1.3 培養(yǎng)基
    1.2 PCR引物設計
    1.3 metI基因加強表達
    1.4 metK基因敲除
    1.5 蛋氨酸產(chǎn)量分析
    1.6 優(yōu)化培養(yǎng)基成分
2 結果與分析
    2.1 質粒pEB03-P43-SD-metI構建
    2.2 電擊轉化質粒pEB03-P43-SD-metI
    2.3 構建質粒pKVM1::metK′
    2.4 改變Bacillus cereus EN34 metK基因
    2.5 蛋氨酸產(chǎn)量分析
    2.6 培養(yǎng)條件優(yōu)化
3 討論
4 結論



本文編號：3936839