cry1A基因編碼蘇云金芽孢桿菌殺蟲晶體蛋白,是轉基因植物使用最為廣泛的抗蟲基因,包括cry1Ab、cry1Ac、cry1A.105、cry1Ab/Ac等類型,cry1A基因為靶標的檢測方法在轉基因植物安全監(jiān)管與檢測中尤為重要。雖已建立數種cry1A基因檢測方法,但均因該基因間序列差別較大而無法覆蓋大部分轉化體。由此,采用簡并引物的策略,開發(fā)了一種cry1A基因通用檢測方法,檢測能力覆蓋了常見的16種含cry1A的轉化體,開發(fā)過程包括實驗室內部方法建立和實驗室間循環(huán)驗證。結果表明,該方法在引物終濃度0.4μmol·L^-1,退火溫度64℃的條件下,能夠特異性檢測樣品中含有的cry1A基因,檢出限為0.1%。開發(fā)的cry1A基因檢測方法參數全面,重復性和重現性良好,為國內外轉基因成分監(jiān)管與檢測提供方法參考。

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【部分圖文】：

圖1PCR反應體系和反應程序優(yōu)化結果

特異性驗證結果(圖2)顯示,僅從含有cry1A基因的材料中獲得預期擴增產物,而從其他樣品中未獲得預期擴增產物,表明方法特異性符合要求。此外,上述不含cry1A基因的材料中包含了部分Bt基因的其他類別,實驗時均未獲得擴增,表明方法對cry1A基因特異性良好,可以用于cry1A基因的....

圖2引物特異性驗證

圖1PCR反應體系和反應程序優(yōu)化結果2.4方法檢出限分析

圖3轉基因玉米Bt176對方法檢出限測試

歐盟標準物質Bt11(0.098%)、MON810(<0.09%)Bt176(0.1%)均能穩(wěn)定檢出,對可檢出的最低質量分數的測試樣品,60次重復實驗均有擴增條帶,確定方法的檢出限為0.1%(部分結果見圖3)。2.5實驗室間重復性分析

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