大豆是我國種植最廣泛的經濟作物之一,是世界上重要的油料作物,具有豐富的營養(yǎng)價值和較高的經濟價值。光信號是保障大豆正常生長發(fā)育的重要環(huán)境因素。光敏色素(Phys)通過在植物體內感知光信號后,與光敏色素互作因子(PIFs)相互作用從而調節(jié)植物生長發(fā)育。PIFs在植物中不僅能夠整合光信號傳導,也參與激素信號轉導,在植物生長發(fā)育過程中也起著十分重要的作用。目前,有關PIFs的研究在擬南芥中相對透徹,大豆中對GmPIFs基因家族的研究比較少。本研究,從大豆品種吉林32中克隆GmPIF1轉錄因子,并對它進行了結構分析和功能驗證,分析結果如下:1.利用RT-PCR的方法從大豆品種吉林32中克隆GmPIF1基因的CDS,全長1530bp,編碼510個氨基酸,含有APA、APB和bHLH保守結構域結構域,屬于bHLH轉錄因子家族,亞細胞定位預測在細胞核中。2.利用實時熒光定量PCR技術,研究了GmPIF1基因在大豆不同組織中的表達情況,結果表明,GmPIF1在根、莖、葉、花、20d、30d、50d胚中均有表達,且表達量表現為葉>花>50d胚>根>30d胚>莖>20d胚...

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
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第1章 文獻綜述
    1.1 PIFs轉錄因子的概述
        1.1.1 PIFs轉錄因子的結構特征
        1.1.2 PIFs轉錄因子光依賴性的磷酸化和降解
    1.2 PIFs轉錄因子的功能
        1.2.1 PIFs參與調解去黃化
        1.2.2 PIFs參與調控種子萌發(fā)
        1.2.3 PIFs參與調控下胚軸伸長
        1.2.4 PIFs參與調控下胚軸負重力
        1.2.5 PIFs參與調節(jié)植物開花
        1.2.6 PIFs參與植物干旱響應
        1.2.7 PIFs參與植物低溫響應
    1.3 調節(jié)種子萌發(fā)的因素
        1.3.1 光信號調節(jié)種子萌發(fā)
        1.3.2 激素調節(jié)種子萌發(fā)
        1.3.3 其他因素調節(jié)種子萌發(fā)
    1.4 實驗方法研究
        1.4.1 實時熒光定量PCR
        1.4.2 酵母雙雜交
        1.4.3 高效液相色譜法
    1.5 本文研究目的與意義
    1.6 技術路線
第2章 大豆轉錄因子基因GmPIF1 的克隆及序列分析
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株及載體
        2.1.3 工具酶及試劑
        2.1.4 主要儀器設備
        2.1.5 PCR引物
    2.2 方法
        2.2.1 大豆總RNA的提取
        2.2.2 cDNA的合成
        2.2.3 大豆GmPIF1的PCR擴增
        2.2.4 PCR產物回收
        2.2.5 大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞的制備
        2.2.6 回收產物連接pMD18-T載體
        2.2.7 凍融法轉化DH5α感受態(tài)細胞
        2.2.8 菌液PCR鑒定
        2.2.9 提取重組質粒
        2.2.10 大豆GmPIF1 基因的序列分析
    2.3 結果
        2.3.1 大豆GmPIF1 基因c DNA全長序列的獲得
        2.3.2 大豆GmPIF1 基因的生物信息學分析
    2.4 討論
    2.5 小結
第3章 Gm PIF1 基因功能的初步分析
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株及載體
        3.1.3 工具酶及試劑
        3.1.4 主要儀器設備
        3.1.5 PCR引物
    3.2 方法
        3.2.1 GmPIF1 在大豆各組織的表達情況
        3.2.2 原核表達
        3.2.3 亞細胞定位
        3.2.4 酵母自激活驗證
        3.2.5 酵母雙雜
    3.3 結果
        3.3.1 GmPIF1 在大豆不同組織的表達
        3.3.2 表達載體的構建
        3.3.3 GmPIF1 重組質粒在原核系統(tǒng)的表達
        3.3.4 GmPIF1 重組質粒在煙草表皮細胞中的瞬時表達
        3.3.5 GmPIF1 的酵母自激活活性驗證
        3.3.6 酵母雙雜驗證GmPIF1 的互作蛋白
    3.4 討論
    3.5 小結
第4章 Gm PIF1 在擬南芥中的表達及功能分析
    4.1 材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌株及載體
        4.1.3 工具酶及試劑
        4.1.4 主要儀器設備
        4.1.5 PCR引物
    4.2 方法
        4.2.1 構建表達載體pCHF3300-GmPIF1
        4.2.2 植物表達載體轉化農桿菌
        4.2.3 擬南芥的遺傳轉化
        4.2.4 擬南芥葉片DNA的提取
        4.2.5 轉基因擬南芥的篩選及鑒定
        4.2.6 T₃代轉基因擬南芥在光處理下的萌發(fā)率測定
        4.2.7 T₃代轉基因擬南芥在紅光和遠紅光處理后萌發(fā)相關基因的表達
        4.2.8 T₃代轉基因擬南芥在紅光和遠紅光處理后GA和 ABA含量測定
    4.3 結果
        4.3.1 植物表達載體pCHF3300-GmPIF1 的構建
        4.3.2 植物表達載體轉化農桿菌的鑒定
        4.3.3 轉基因擬南芥陽性植株的篩選及鑒定
        4.3.4 T₃代轉基因擬南芥在不同光處理下的萌發(fā)率
        4.3.5 T₃代轉基因擬南芥光處理后萌發(fā)相關基因的表達量
        4.3.6 T₃代轉基因擬南芥紅光和遠紅光處理后GA和 ABA含量
    4.4 討論
    4.5 小結
第5章 結果與展望
參考文獻
作者簡介
致謝



本文編號：3871633