心血管疾病多年來一直位于全球居民疾病致死的首位。其中,腦卒中(Stroke)、冠心病(Coronary heart disease)、肺原性心臟病(Pulmonary heart disease)和心力衰竭(Heart failure,HF)等心血管疾病近幾年來患病人數(shù)持續(xù)增加。而心臟肥大作為一項嚴(yán)重的心臟異常指標(biāo),如果不能及時得到控制,將會使得心臟的代償功能失調(diào),從而引發(fā)心力衰竭等一系列致死性心臟疾病。心臟肥大是由于受到外部因素或內(nèi)源性因素帶來的各種刺激的情況下心臟為了維持正常的心輸出量,導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成增加和心肌細(xì)胞體積增大,而引起的心臟異常。而心肌細(xì)胞內(nèi)外Ca2+濃度的改變與心臟肥大的發(fā)生有著密切關(guān)聯(lián),Ca2+調(diào)節(jié)機(jī)制發(fā)生障礙是心臟肥大發(fā)生的重要原因。CMDA、CMDB作為參與細(xì)胞膜上鈣離子通道蘭尼堿受體2(Ryanodinereceptor2,RyR2)通道調(diào)節(jié)的相關(guān)蛋白,對于心肌細(xì)胞的鈣離子調(diào)節(jié)發(fā)揮著重要作用。目前的研究中,已知CMD作為磷蛋白磷酸酶PPT家族中的一種,可使T細(xì)胞核因子(Nuclear factor of activated Tcells,NFAT)活化而發(fā)生去...

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【學(xué)位級別】：碩士

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摘要
Abstract
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第1章 引言
    1.1 CMD的結(jié)構(gòu)和功能
    1.2 CMD關(guān)于心臟肥大的研究進(jìn)展
        1.2.1 CMD與心臟肥大
        1.2.2 CMD抑制劑
    1.3 PPTA的結(jié)構(gòu)和功能
    1.4 PPTA關(guān)于心臟肥大的相關(guān)研究
    1.5 CAMRs的結(jié)構(gòu)和功能
    1.6 RYR的結(jié)構(gòu)和功能
    1.7 鈣調(diào)蛋白介導(dǎo)的心臟肥大信號通路
    1.8 本課題的研究目的及意義
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料與設(shè)備
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 溶液配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 分子克隆
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)實驗
        2.2.3 Western blot
        2.2.4 實時熒光定量PCR
        2.2.5 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 實驗結(jié)果與分析
    3.1 分子克隆
        3.1.1 CMD A和CMD B目的片段克隆
        3.1.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.1.3 重組質(zhì)粒測序結(jié)果
        3.1.4 CMD A全序列目的片段克隆結(jié)果
    3.2 PEI法細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染
        3.2.1 CMD A、CMD B重組質(zhì)粒的細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染
        3.2.2 CMD A基因全序列重組質(zhì)粒的細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染
    3.3 CMD A基因及其完整序列和CMD B基因?qū)τ诩?xì)胞表征的影響
        3.3.1 過表達(dá)CMD基因?qū)τ诩?xì)胞體積的影響
        3.3.2 過表達(dá)CMD基因?qū)τ诩?xì)胞面積的影響
    3.4 CMD A及其全序列和CMD B基因過表達(dá)對于心臟肥大相關(guān)鈣調(diào)基因在蛋白表達(dá)水平的影響
        3.4.1 CMD A及其全序列和CMD B基因?qū)AMR 1和CAMR 2蛋白表達(dá)的影響
        3.4.2 CMD A及其全序列和CMD B基因?qū)PTA蛋白表達(dá)的影響
    3.5 CMD A及其全序列和CMD B基因?qū)τ谛呐K肥大相關(guān)鈣調(diào)蛋白基因在mRNA表達(dá)水平的影響
        3.5.1 總RNA的提取及檢測
        3.5.2 CMD過表達(dá)對CAMR 1和CAMR 2基因mRNA水平表達(dá)量的影響
        3.5.3 CMD過表達(dá)對PPTAA和PPTA C基因mRNA水平表達(dá)量的影響
    3.6 細(xì)胞周期同步化
    3.7 細(xì)胞周期測定結(jié)果
第4章 討論
    4.1 兩種細(xì)胞材料的特征及PEI轉(zhuǎn)染效果
    4.2 CMD對于細(xì)胞肥大的調(diào)節(jié)
        4.2.1 CMD對于細(xì)胞體積的調(diào)節(jié)
        4.2.2 CMD對于細(xì)胞面積的調(diào)節(jié)
    4.3 CMD與心臟內(nèi)鈣相關(guān)蛋白的相互作用
        4.3.1 CMD對于蛋白表達(dá)水平的影響
        4.3.2 CMD對于mRNA表達(dá)水平的影響
    4.4 過表達(dá)CMD對于細(xì)胞周期的影響
    4.5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間的科研成果



本文編號：3860330