該研究以龍眼胚性愈傷組織的轉錄組數據為基礎,對龍眼胚性愈傷組織DlDRM1基因進行克隆和生物學信息分析,并檢測其在體胚發(fā)生過程中不同發(fā)育階段、不同濃度的外源激素(2,4-D、IAA、KT)處理下及不同組織部位的表達,以揭示DlDRM1基因在龍眼體胚發(fā)生過程中的功能。結果表明:(1)從龍眼轉錄組unigene序列篩選獲得龍眼結構域重排甲基化酶1基因(命名為DlDRM1)全長序列,并利用RT-PCR法從‘紅核子’龍眼胚性愈傷組織中克隆獲得DlDRM1基因的cDNA全長序列(GenBank登錄號為KY990493);DlDRM1基因cDNA全長2 574bp,包括494bp的5′UTR,184bp的3′UTR,可編碼包含631個氨基酸的蛋白質。(2)生物信息學分析顯示,DlDRM1是一個不穩(wěn)定的親水蛋白,不含信號肽,不存在跨膜結構域,其分子式為C₃₁₀₄H₄₈₃₉N₈₅₁O₉₈₄S₂₈;序列比對和系統(tǒng)進化分析表明,龍眼DlDRM1與臍橙DRM相似度最高(76.85%),二者親緣關系也...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 激素處理龍眼胚性愈傷組織
        1.2.2 總RNA提取及逆轉錄
        1.2.3 轉錄組數據分析及DlDRM1基因序列的獲得
        1.2.4 引物設計
        1.2.5 目的基因的擴增
        1.2.6 生物信息分析
        1.2.7 實時熒光定量PCR
        1.2.8 洋蔥亞細胞定位
2 結果與分析
    2.1 龍眼DlDRM1基因cDNA全長序列的獲得與驗證
    2.2 龍眼DlDRM1生物信息學分析
    2.3 龍眼DlDRM1氨基酸序列比對及進化分析
    2.4 龍眼DlDRM1基因轉錄水平的qPCR分析
        2.4.1 DlDRM1在‘四季蜜’龍眼不同組織部位中的表達情況
        2.4.2 DlDRM1在龍眼非胚性和胚性培養(yǎng)物中轉錄水平的qPCR分析
        2.4.3 DlDRM1在不同外源激素 (IAA、KT、2, 4-D) 處理下的表達模式
    2.5 龍眼DlDRM1的亞細胞定位分析
3 討論
    3.1 DlDRM1是一個定位于細胞膜和細胞核的含泛素結合域的蛋白
    3.2 DlDRM1在龍眼體胚發(fā)生過程中發(fā)揮著重要調控作用
    3.3 DlDRM1的表達受生長素和細胞分裂素調控



本文編號：3851846