目的:氣道重塑被認為是支氣管哮喘治療的重點與難點,但遺憾的是目前尚無有效的措施來逆轉或預防氣道重塑。研究發(fā)現促紅細胞生成素(erythropoietin,EPO)具有組織細胞保護作用和氣道重塑拮抗效應,但正常時體內表達量非常低,不足以拮抗致氣道重塑因素。已證實骨髓間充質干細胞(MSCs)可改善哮喘氣道重塑,而且EPO基因修飾骨髓間充質干細胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,MSCs)后,MSCs的增殖、遷移能力顯著增強。因此本研究采用EPO基因修飾的MSCs(EPO-MSCs)干預慢性哮喘小鼠模型,觀察EPO-MSCs對哮喘氣道重塑的影響。方法:(1)構建過表達EPO基因的慢病毒載體系統,再用該病毒載體轉染MSCs,對構建成功的過表達EPO基因的MSCs穩(wěn)轉株用Real-Time和Western blot檢測EPO的表達情況。(2)用MSCs或EPO-MSCs干預卵清蛋白(OVA)誘導的慢性哮喘小鼠模型。干預后,通過瑞氏染色觀察支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細胞總數和炎性細胞數(嗜酸性粒細胞)的變化;ELISA法測定肺組織勻漿中炎性...

【文章頁數】：118 頁

【學位級別】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
文獻回顧
    一、氣道重塑的機制及其影響因素
        1.支氣管哮喘的氣道重塑
        2.氣道重塑的發(fā)生機制
        3.氣道重塑的防治對策
    二、促紅細胞生成素的生物學作用
        （1）促紅細胞生成素
        （2）促紅細胞生成素受體
        （3）EPO在哮喘氣道重塑中作用的調控機制
    三、間充質干細胞與氣道重塑
    四、促紅細胞生成素在哮喘氣道重塑中的作用
    六、促紅細胞生成素基因修飾間充質干細胞治療的可行性
    七、存在的問題及我們的研究假設
第一部分EPO基因修飾的骨髓間充質干細胞穩(wěn)定株構建
    1 材料
        1.1 過表達載體信息
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
        1.4 細胞株
    2 方法
        2.1 構建EPO基因過表達載體
        2.2 慢病毒的包裝和病毒滴度的測定
        2.3 慢病毒轉染MSCs，構建穩(wěn)轉株
    3 結果
        3.1 構建EPO基因過表達載體
        3.2 慢病毒的包裝和病毒滴度的測定
        3.3 慢病毒轉染MSCs，構建穩(wěn)轉株
    4 討論
第二部分EPO基因修飾的MSCS對哮喘氣道重塑的影響
    1 材料
        1.1 EPO基因修飾的MSCs分化鑒定
        1.2 建立慢性哮喘氣道重塑模型及EPO-MSCs干預
        1.3 氣道重塑組織病理學和相關細胞因子的變化
    2 方法
        2.1 EPO基因修飾的MSCs分化鑒定
        2.2 建立慢性哮喘氣道重塑模型及EPO-MSCs干預
        2.3 氣道重塑組織病理學和相關細胞因子的變化
    3 結果
        3.1 EPO基因修飾的MSCs分化鑒定
        3.2 建立慢性哮喘氣道重塑模型及EPO-MSCs干預
        3.3 氣道重塑組織病理學和相關細胞因子的變化
    4 討論
第三部分EPO基因修飾的MSCS對哮喘氣道重塑影響的機制
    1 材料
        1.1 Real-Time PCR檢測TGF-β1-TAK1-p38 MAPK通路m RNA的表達
        1.2 Western Blot檢測TGF-β1-TAK1-p38 MAPK通路蛋白的表達
        1.3 配制緩沖液
    2 方法
        2.1 Real-Time PCR檢測TGF-β1-TAK1-p38 MAPK通路m RNA的表達
        2.2 Western Blot檢測TGF-β1-TAK1-p38 MAPK通路蛋白的表達
        2.3 統計分析
    3 結果
        3.1 Real-Time PCR檢測TGF-β1-TAK1-p38 MAPK通路m RNA的表達
        3.2 Western Blot檢測TGF-β1-TAK1-p38 MAPK通路蛋白的表達
    4 討論
小結
參考文獻
個人簡歷和研究成果
致謝



本文編號：3839940