目的探討中樞神經(jīng)特異蛋白(S100β)基因單核苷酸多態(tài)性對(duì)微小RNA(miRNA)靶向調(diào)控的影響。方法利用Target Scan在線軟件,尋找調(diào)控S100β基因的miRNA及其配對(duì)結(jié)合位點(diǎn)。構(gòu)建S100β基因rs9722位點(diǎn)不同基因型載體并鑒定。將構(gòu)建的S100β基因rs9722位點(diǎn)不同基因型載體(S100β-rs9722C、S100β-rs9722T、S100β-rs9722Cmut)與miRNA模擬物(miRNA mimics、miR-340-3p、miR-593-3p、miR-6827-3p)兩兩組合共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,采用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)各組合培養(yǎng)液上清熒光素酶活性。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞,分別轉(zhuǎn)染miRNA mimics、miR-340-3p、miR-593-3p、miR-6827-3p,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)相應(yīng)miRNA表達(dá),采用Western blotting法檢測(cè)S100β表達(dá)。結(jié)果 miR-340-3p、miR-6827-3p的5’-CUCUGCC-3’序列與S100β基因3’非編碼區(qū)(3’UTR)的5’-GAGACGG-3’序...

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 miRNA與S100β基因靶向調(diào)控關(guān)系預(yù)測(cè)
    1.3 S100β基因rs9722位點(diǎn)不同基因型載體構(gòu)建
    1.4 雙熒光素酶活性檢測(cè)
    1.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    1.6 miRNA表達(dá)檢測(cè)
    1.7 S100β表達(dá)檢測(cè)
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 miRNA與S100β基因的靶向調(diào)控關(guān)系
    2.2 S100β基因rs9722位點(diǎn)不同基因型載體鑒定
    2.3 各組雙熒光素酶活性比較
    2.4 各組轉(zhuǎn)染后相應(yīng)miRNA表達(dá)比較
    2.5各組轉(zhuǎn)染后S100β表達(dá)比較
3 討論



本文編號(hào)：3832032