發(fā)布時(shí)間：2023-06-03 17:14

　　凝集素(Lectin)是一類(lèi)能與糖進(jìn)行非共價(jià)可逆結(jié)合的蛋白質(zhì),具有凝集細(xì)胞和聚糖的作用。在牙鲆的集約化養(yǎng)殖過(guò)程中,會(huì)面臨許多病原微生物的入侵,造成大量的經(jīng)濟(jì)損失,研究表明魚(yú)卵凝集素(Fish egg lectin)是凝集素超家族中的一員,在硬骨魚(yú)的抗菌免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用。在本研究中,克隆驗(yàn)證了牙鲆FEL1基因(Fish egg lectin 1,PoFEL1),其中開(kāi)放閱讀框(Open reading frame, ORF)為675 bp,編碼224個(gè)氨基酸,蛋白分子量為24.8 kDa。PoFEL1組織表達(dá)分析顯示,PoFEL1在卵巢、腸以及肝臟中的表達(dá)量比較高;胚胎發(fā)育過(guò)程中PoFEL1表達(dá)分析顯示,在胚胎發(fā)育的早期PoFEL1的表達(dá)量比較高,隨著胚胎的逐漸成熟,其表達(dá)量逐漸降低,呈母源性表達(dá)。體外細(xì)胞刺激實(shí)驗(yàn)表明LPS、PGN、Poly(I∶C)和E.tarda刺激牙鲆卵巢細(xì)胞系后,PoFEL1的表達(dá)上調(diào)。利用牙鲆卵巢細(xì)胞研究了PoFEL1蛋白的亞細(xì)胞定位,證實(shí)其分布在細(xì)胞質(zhì)中。用LPS刺激過(guò)表達(dá)PoFEL1的牙鲆卵巢細(xì)胞系,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子p38、IL-6和TNF-α的表達(dá)顯著上調(diào)...

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.1.2 模板來(lái)源
        1.1.3 細(xì)胞系來(lái)源
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1
        1.2.2 PoFEL1序列分析
        1.2.3 PoFEL1組織表達(dá)分析
        1.2.4 PoFEL1胚胎發(fā)育模式表達(dá)分析
        1.2.5 牙鲆p-EGFP-FEL1質(zhì)粒構(gòu)建
        1.2.6 體外細(xì)胞刺激實(shí)驗(yàn)
        1.2.7 PoFEL1過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)
        1.2.8 pRL-TK質(zhì)粒、NF-κB熒光素酶質(zhì)粒與重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞
        1.2.9 實(shí)時(shí)熒光定量(qRT-PCR)
        1.2.10 數(shù)據(jù)處理
2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.1 PoFEL1序列分析
        2.1.1 PoFEL1的ORF序列擴(kuò)增
        2.1.2 PoFEL1的系統(tǒng)進(jìn)化分析
    2.2 PoFEL1的組織表達(dá)分析
    2.3 PoFEL1的發(fā)育表達(dá)模式分析
    2.4 免疫刺激牙鲆卵巢細(xì)胞系后PoFEL1的mRNA表達(dá)水平分析
    2.5 過(guò)表達(dá)PoFEL1對(duì)p38,IL-6,TNF-α等細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用
    2.6 PoFEL1的亞細(xì)胞定位
    2.7 過(guò)表達(dá)PoFEL1對(duì)NF-κB的影響
3 討論



本文編號(hào)：3829713