目的探究HNF4A在結(jié)直腸腫瘤進展中的作用。方法構(gòu)建HNF4A過表達或敲除的結(jié)直腸癌細胞系,通過實時定量PCR和Western blot檢測構(gòu)建的細胞系HNF4A的表達水平;通過軟瓊脂及平板克隆形成實驗檢測細胞系的克隆形成能力,CCK-8法檢測細胞的增殖能力;Western blot檢測干細胞標志物的表達水平;最后通過Transwell遷移與侵襲實驗檢測細胞的遷移侵襲能力,R2基因分析平臺分析結(jié)直腸癌中HNF4A與基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2及MMP9表達的相關(guān)性并通過Western blot驗證。結(jié)果過表達HNF4A抑制了結(jié)直腸腫瘤細胞的增殖與克隆形成能力及遷移侵襲能力,敲低HNF4A促進了結(jié)直腸癌細胞的增殖與克隆能力及遷移侵襲能力,Western blot顯示HNF4A抑制了結(jié)直腸癌干細胞的標志物CD133、CD44及EpCAM的表達和基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2及MMP9的表達,在HNF4A敲低的細胞系中得出了同樣的結(jié)論。結(jié)論 HNF4A通過抑制結(jié)直腸癌干細胞特征及金屬蛋白酶的表達來抑制結(jié)直腸腫瘤的進展。

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【文章目錄】：
0 引言
1 材料及方法
    1.1 細胞及培養(yǎng)
    1.2 試劑
    1.3 慢病毒轉(zhuǎn)染
    1.4 實時定量PCR(qPCR)
    1.5 克隆形成實驗
    1.6 CCK-8實驗
    1.7 遷移及侵襲實驗
    1.8 Western blot法檢測蛋白表達
    1.9 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 LoVo、SW620高表達HNF4A及HT-29、SW480敲降HNF4A的穩(wěn)定細胞系的構(gòu)建
    2.2 HNF4A抑制結(jié)直腸腫瘤細胞的克隆、增殖能力及降低干細胞標志物的表達
    2.3 敲降HNF4A促進結(jié)直腸腫瘤細胞的克隆、增殖及增強干細胞標志物的表達
    2.4 高表達HNF4A抑制結(jié)直腸癌細胞的遷移侵襲
    2.5 敲降HNF4A增強結(jié)直腸癌細胞的遷移侵襲
    2.6 HNF4A調(diào)節(jié)MMP2和MMP9的表達
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