腫瘤是基因的體細胞突變的累積導致的。新生抗原肽是由這些突變造成的氨基酸序列變化的蛋白質(zhì)在一系列生化反應后被MHC-Ⅰ分子遞呈的一段含有突變氨基酸的多肽。新生抗原肽只表達于腫瘤細胞表面,并且不受免疫耐受的影響,這使其成為免疫治療的理想靶點。本文結(jié)合質(zhì)譜和新一代高通量測序技術(shù),利用免疫沉淀和蛋白提取兩種策略嘗試從人腫瘤細胞系和實體瘤組織中發(fā)現(xiàn)新生抗原肽。免疫沉淀非小細胞肺癌細胞系NCI-H460總共鑒定到758條不同的遞呈肽,并鑒定到一條癌胚抗原肽EVSEPSMLQK。我們合成了包括癌胚抗原肽的4條多肽進行驗證,進一步增加了鑒定到的多肽的可信度。但是,通過免疫沉淀的方式,我們未能從細胞系或是人腫瘤組織中鑒定到新生抗原肽。蛋白提取的結(jié)果顯示甲醇/氯仿提取后Trypsin酶解適用于發(fā)現(xiàn)腫瘤組織或腫瘤細胞系中由點突變形成的新生抗原。TritonX-114的提取方式可以對甲醇/氯仿的結(jié)果進行擴充。在不同腫瘤組織的實驗證實了這兩種提取方法的可行性。我們合成驗證了其中一條突變多肽,并結(jié)合預測得到一條新生抗原肽KAYHEQLSV。因此,質(zhì)譜鑒定得到的新生抗原,可優(yōu)先進行新生抗原肽的預測和免疫原性的檢測。...

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞
1 緒論
    1.1 癌癥治療
    1.2 主要組織相容性復合體蛋白
    1.3 新生抗原及遞呈原理
    1.4 質(zhì)譜在檢測新生抗原肽的應用
    1.5 本研究的目的和內(nèi)容
    1.6 技術(shù)路線
2 腫瘤細胞系和組織的MHC-Ⅰ遞呈肽的探究
    2.1 前言
    2.2 實驗儀器與材料
    2.3 實驗步驟與方法
    2.4 實驗結(jié)果
    2.5 實驗討論
    2.6 小結(jié)
3 腫瘤細胞系和組織的新生抗原的鑒定
    3.1 前言
    3.2 實驗儀器與材料
    3.3 實驗步驟與方法
    3.4 實驗結(jié)果
    3.5 小結(jié)
結(jié)論與展望
參考文獻
附錄
綜述
    參考文獻
作者簡介



本文編號：3787366