糖為植物提供重要的碳源和能源。植物生長發(fā)育過程中糖轉(zhuǎn)運蛋白對調(diào)節(jié)糖類運轉(zhuǎn)與分布起著至關重要的作用。SWEETs基因家族作為近年來發(fā)現(xiàn)的糖轉(zhuǎn)運蛋白可以參與對多種單糖和多糖的轉(zhuǎn)運,但目前對SWEETs家族成員的生理功能及其作用機制仍有許多問題需要解決。如SWEETs家族成員的亞細胞定位及其時空表達特性等。前期研究表明Sl SWEET7a,-11b,-12c和-14基因在番茄果實成熟的綠熟期與紅熟期有不同的表達模式,推測SWEETs基因可能參與番茄果實成熟過程中糖的轉(zhuǎn)運與分配。驅(qū)動基因表達的啟動子是調(diào)控基因表達的重要元件,在基因表達的功能調(diào)控中顯得尤其重要。本研究對Sl SWEET7a,-11b,-12c和-14的4個基因及啟動子進行組織分布與亞細胞定位分析,通過聚合酶鏈式反應克隆基因全長以及啟動子,構(gòu)建SlSWEETn::GUS與SlSWEETn::GFP載體,通過番茄果實的瞬時表達與擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化進行GUS活性的分析來說明啟動子的表達模式,通過洋蔥與煙草葉片的瞬時表達,進行4個SWEETs基因的亞細胞定位。獲得的主要研究結(jié)果如下:1、利用Gateway技術構(gòu)建了4個SWEETs基因的S...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 SWEETs基因家族研究進展
        1.1.1 SWEETs蛋白的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 植物SWEET蛋白的結(jié)構(gòu)特征
        1.1.3 植物SWEET蛋白的功能
    1.2 高等植物啟動子功能的研究進展
        1.2.1 植物啟動子的結(jié)構(gòu)特征
        1.2.2 高等植物啟動子類型
        1.2.3 高等植物啟動子研究方法
    1.3 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 植物材料與培養(yǎng)
        2.1.2 菌株及載體
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器設備
        2.1.5 試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 引物設計
        2.2.2 基因組DNA的提取
        2.2.3 PCR擴增目的片段
        2.2.4 DNA片段的回收
        2.2.5 啟動子的GUS表達載體構(gòu)建
        2.2.6 GFP載體構(gòu)建
        2.2.7 GUS組織化學染色分析
        2.2.8 洋蔥表皮細胞的瞬時表達
        2.2.9 煙草葉片的瞬時表達
3 結(jié)果與分析
    3.1 番茄果實4個SWEETs基因啟動子的序列分析
    3.2 啟動子GUS表達載體的構(gòu)建
        3.2.1 番茄DNA提取與檢測
        3.2.2 啟動子片段的克隆
        3.2.3 啟動子GUS表達載體的構(gòu)建
    3.3 SlSWEET7a,-11b,-12c及-14基因的GFP融合表達載體的構(gòu)建
        3.3.1 SlSWEET7a,-11b,-12c及-14基因cDNA全長的獲得
        3.3.2 GFP載體構(gòu)建
    3.4 番茄果實的瞬時表達
    3.5 啟動子GUS表達載體在擬南芥中的遺傳轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)基因材料的鑒定
        3.5.1 擬南芥抗性植株的篩選
        3.5.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥GUS組織化學染色分析
    3.6 SlSWEET7a,-11b,-12c及-14在洋蔥表皮細胞的亞細胞定位分析
    3.7 SlSWEET7a,-11b,-12c,-14在煙草葉片的亞細胞定位分析
4 討論
    4.1 番茄4個SWEETs基因的組織分布與亞細胞定位特征
    4.2 SlSWEET7a和SlSWEET14啟動子截短對基因表達組織分布的影響
5 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3767324