美國(guó)白蛾核型多角體病毒（Hyphantria cunea Nuclear Polyhedrosis Virus,HycuNPV）作為一種強(qiáng)效、無(wú)危害、專(zhuān)化性強(qiáng)和環(huán)境友好型的生防致病因子,在美國(guó)白蛾種群的持續(xù)防控中占據(jù)重要地位。本論文通過(guò)高效、快速的HycuNPV定量檢測(cè)方法和ORF72基因的研究,為該病毒的持續(xù)控制提供了可行的監(jiān)測(cè)方法,同時(shí)彌補(bǔ)了其在ORF72基因功能研究上的空白。論文研究結(jié)果如下:1.利用TaqMan探針?lè)ǔ晒⒘藢?shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)HycuNPV含量進(jìn)行檢測(cè)的方法。首先,將polh基因構(gòu)建到pGEM-T-easy載體上,制備標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒。然后,將標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒10倍梯度稀釋為1.0×10~8、1.0×10~7、1.0×10~6、1.0×10~5、1.0×10~4和1.0×10~3copies/μL 6個(gè)梯度濃度,以此為模版進(jìn)行熒光定量PCR,建立標(biāo)準(zhǔn)品的擴(kuò)增曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線。最后,通過(guò)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出幼蟲(chóng)在接毒后的不同時(shí)間點(diǎn)其體內(nèi)所含的病毒拷貝數(shù)。驗(yàn)證方法:以取食3.0×10~6PIB/mL濃度病毒的美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)基因組DNA為模版,進(jìn)行熒光定量PCR后發(fā)現(xiàn),病毒在幼蟲(chóng)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 桿狀病毒概況
        1.1.1 桿狀病毒簡(jiǎn)介
        1.1.2 桿狀病毒的分類(lèi)
        1.1.3 桿狀病毒的應(yīng)用概況
    1.2 美國(guó)白蛾
        1.2.1 美國(guó)白蛾生物學(xué)特性
        1.2.2 美國(guó)白蛾的發(fā)生與危害
        1.2.3 美國(guó)白蛾的防治概況
    1.3 美國(guó)白蛾核型多角體病毒
        1.3.1 美國(guó)白蛾核型多角體病毒簡(jiǎn)介及其應(yīng)用
        1.3.2 美國(guó)白蛾核型多角體病毒的檢測(cè)
        1.3.3 美國(guó)白蛾核型多角體病毒基因的研究
    1.4 研究目的與意義、內(nèi)容及技術(shù)路線
        1.4.1 研究目的與意義
        1.4.2 主要研究?jī)?nèi)容
        1.4.3 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 供試蟲(chóng)源
        2.1.2 儀器與設(shè)備
        2.1.3 試劑及緩沖液的配置
    2.2 方法
        2.2.1 HycuNPV Taq Man探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)方法的建立
        2.2.2 HycuNPV ORF72基因的研究
3 結(jié)果與分析
    3.1 HycuNPV Taq Man探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)方法的建立
        3.1.1 HycuNPV polh基因的擴(kuò)增
        3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒的制備
        3.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與擴(kuò)增曲線的繪制
        3.1.4 重復(fù)性驗(yàn)證
        3.1.5 不同時(shí)間點(diǎn)幼蟲(chóng)體內(nèi)病毒含量
    3.2 HycuNPV ORF72基因的研究
        3.2.1 HycuNPV基因組DNA的提取
        3.2.2 HycuNPV ORF72基因的擴(kuò)增
        3.2.3 ORF72基因的生物信息學(xué)分析
        3.2.4 限制性?xún)?nèi)切酶對(duì)ORF72基因和pGEX-4T-1 載體質(zhì)粒的雙酶切
        3.2.5 HycuNPV-p GEX-4T1ORF72重組質(zhì)粒表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.6 HycuNPV-p GEX-4T1ORF72原核表達(dá)載體的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.7 ORF72蛋白可溶性表達(dá)的鑒定及其蛋白的純化
4 結(jié)論與討論
    4.1 結(jié)論
    4.2 討論
        4.2.1 探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)方法的建立
        4.2.2 ORF72蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)分析
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]駑巴貝斯蟲(chóng)TaqMan-MGB熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 張楊,王振寶,劉世芳,瓦熱斯·吐?tīng)査?巴音查汗.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(01)
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[10]周氏嚙小蜂規(guī)模繁放及HcNPV與Bt混劑對(duì)美國(guó)白蛾的防治效果研究[J]. 徐明,王光標(biāo),王麗,張利華,徐福元.  江蘇林業(yè)科技. 2014(03)

博士論文
[1]家蠶核多角體病毒（BmNPV）orf126基因的功能研究[D]. 郝碧芳.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008
[2]美國(guó)白蛾NPV與Bt混合致病機(jī)理及其對(duì)寄主種群持續(xù)控制作用[D]. 段彥麗.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 2008
[3]美國(guó)白蛾核型多角體病毒及其感病寄主檢測(cè)方法的研究[D]. 喬魯芹.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 2007

碩士論文
[1]家蠶桿狀病毒ie0基因功能的研究[D]. 張婷.浙江理工大學(xué) 2016
[2]美國(guó)白蛾防治主要技術(shù)研究及綜合防治應(yīng)用[D]. 岳耀鵬.南京林業(yè)大學(xué) 2012
[3]美國(guó)白蛾綜合防治技術(shù)研究[D]. 高冬梅.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3725982