SWEET（Sugars Will Eventually be Exported Transporters）蛋白是近年來鑒定的一類新型糖轉(zhuǎn)運蛋白,可以選擇地將單糖或者二糖通過質(zhì)膜或者細胞內(nèi)膜進行轉(zhuǎn)運,在植物發(fā)育和脅迫反應中發(fā)揮關鍵作用。SWEET蛋白能從受感染的細胞中引起糖泄露從而使植物易感于病原菌。目前為止,SWEET基因已經(jīng)在擬南芥、水稻、番茄、棉花、煙草、馬鈴薯、大豆、梨等物種中被鑒定,然而在桑樹中還未有相關的報道,在桑樹脅迫反應中發(fā)揮的作用也尚未知曉。另外,在本研究小組前期對易感桑椹菌核病品種和抗病品種的轉(zhuǎn)錄組測序比較分析發(fā)現(xiàn)部分SWEET基因與果桑菌核病的抗性有密切聯(lián)系�；谝陨峡紤],本研究通過生物信息學的方法,利用川桑數(shù)據(jù)庫全面鑒定了SWEET基因,對其基因結(jié)構(gòu)、跨膜結(jié)構(gòu)域和系統(tǒng)進化關系進行了分析。通過熒光定量PCR分析了SWEET基因在青果、病果和紅果桑椹的表達模式,并選擇MaSWEET4和MaSWEET15為后續(xù)研究對象。構(gòu)建MaSWEET4和MaSWEET15過表達載體,以農(nóng)桿菌為介導轉(zhuǎn)入煙草中進行異源表達,成功獲得了3株MaSWEET4過表達轉(zhuǎn)基因煙草株系和4株Ma... 

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 植物體內(nèi)糖的代謝
    1.2 植物中糖的韌皮部裝載途徑
        1.2.1 質(zhì)外體裝載途徑
        1.2.2 共質(zhì)體裝載途徑
        1.2.3 聚合物捕獲途徑
    1.3 糖轉(zhuǎn)運蛋白的轉(zhuǎn)運機制
        1.3.1 己糖和蔗糖/H+轉(zhuǎn)運蛋白的轉(zhuǎn)運機制
        1.3.2 Na~+/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白的轉(zhuǎn)運機制
        1.3.3 SWEET蛋白的轉(zhuǎn)運機制
    1.4 SWEET蛋白的研究進展
        1.4.1 SWEET蛋白的結(jié)構(gòu)和分類
        1.4.2 SWEET蛋白的生理功能
        1.4.3 桑樹SWEET蛋白的研究進展
第二章 引言
    2.1 研究背景及意義
    2.2 研究主要內(nèi)容
    2.3 技術路線
第三章 桑樹SWEET基因的鑒定及生物信息學分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 桑樹SWEET基因的鑒定
        3.1.2 基因結(jié)構(gòu)及基序分析
        3.1.3 系統(tǒng)進化分析及跨膜結(jié)構(gòu)域預測
    3.2 結(jié)果和分析
        3.2.1 桑樹SWEET基因的鑒定
        3.2.2 桑樹SWEET基因結(jié)構(gòu)與基序分析
        3.2.3 桑樹SWEET蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域預測
        3.2.4 桑樹SWEET蛋白多序列比對與系統(tǒng)進化分析
    3.3 小結(jié)與討論
第四章 桑樹SWEET基因的表達譜分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 RNA的提取
        4.2.2 cDNA第一鏈的合成與檢測
        4.2.3 桑樹SWEET基因的熒光定量PCR
    4.3 結(jié)果和分析
        4.3.1 桑樹SWEET基因的組織表達分析
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 Ma SWEET4及Ma SWEET15 的轉(zhuǎn)基因過表達分析
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 實驗試劑
        5.1.3 實驗儀器
        5.1.4 實驗溶液配制方法
    5.2 實驗方法
        5.2.1 轉(zhuǎn)基因過表達載體的構(gòu)建
        5.2.2 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化
        5.2.3 葉盤法轉(zhuǎn)化煙草
        5.2.4 轉(zhuǎn)基因植株的陽性檢測
        5.2.5 轉(zhuǎn)基因植株目的基因及抗病相關基因表達量的測定
    5.3 結(jié)果和分析
        5.3.1 Ma SWEET4和Ma SWEET15 轉(zhuǎn)基因過表達載體的構(gòu)建
        5.3.2 陽性轉(zhuǎn)基因煙草的驗證
        5.3.3 陽性轉(zhuǎn)基因煙草對抗病相關基因的影響
    5.4 小結(jié)與討論
第六章 綜合與結(jié)論
參考文獻
在讀期間發(fā)表論文及參加課題
致謝



本文編號：3705508