譜系重編程在肝病治療,特別是終末期肝�。‥nd-stage liver disease,ESLD）治療領(lǐng)域被深入研究。安全高效的基因載體是該技術(shù)成功應(yīng)用的關(guān)鍵。當(dāng)歸多糖（Angelica sinensis polysaccharide,ASP）表面覆蓋大量活性基團(tuán),易于被陽離子化修飾,是一種新型、安全、高效的基因載體,近年來被廣泛應(yīng)用于基因傳遞。本論文使用水提醇沉法制備ASP,選用聚乙烯亞胺（Polyethyleneimine,PEI）對ASP進(jìn)行陽離子化修飾,利用陽離子化當(dāng)歸多糖（ASP-PEI）與質(zhì)粒HNF1A之間的靜電相互作用力,制得cASP-pHNF1A自組裝納米粒,并且進(jìn)一步對該納米粒介導(dǎo)的肝臟細(xì)胞重編程做了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,cASP-pHNF1A自組裝納米粒形態(tài)圓整,大小均一,細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率高。誘導(dǎo)的人源肝細(xì)胞（Induced human hepatocytes,ihHeps）能表達(dá)肝臟標(biāo)志蛋白ALB,AAT,CK18,CK19和藥物代謝酶CYP450,UGT,GST,攝取和排泄吲哚菁綠（Indocyanine Green,ICG）,儲(chǔ)存糖原,攝取低密度脂蛋白（Low De... 

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
引言
第一章 綜述
    1 肝病的概述及研究進(jìn)展
    2 細(xì)胞療法應(yīng)用于肝病治療研究進(jìn)展
        2.1 原代肝細(xì)胞
        2.2 肝祖細(xì)胞
        2.3 干細(xì)胞
        2.4 譜系重編程
            2.4.1 病毒型基因載體介導(dǎo)的譜系重編程
            2.4.2 非病毒型基因載體介導(dǎo)的譜系重編程
            2.4.3 存在的問題和局限性
    3 天然多糖作為新型非病毒基因載體研究進(jìn)展和展望
    4 本論文的研究意義與內(nèi)容
        4.1 研究對象與意義
        4.2 研究思路與內(nèi)容
第二章 中藥多糖的提取、分離、純化及結(jié)構(gòu)解析
    1 儀器與試劑
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
    2 實(shí)驗(yàn)與方法
        2.1 當(dāng)歸藥材的預(yù)處理
        2.2 當(dāng)歸粗多糖的提取
        2.3 當(dāng)歸多糖的純化
            2.3.1 粗多糖除蛋白
            2.3.2 柱層析法
        2.4 當(dāng)歸多糖的結(jié)構(gòu)解析
            2.4.1 分子量測定
            2.4.2 糖醛酸含量測定
            2.4.3 剛果紅實(shí)驗(yàn)
            2.4.4 單糖組成
    3 結(jié)果與討論
        3.1 當(dāng)歸多糖的純化
            3.1.1 粗多糖除蛋白
            3.1.2 柱層析法
        3.2 當(dāng)歸多糖的結(jié)構(gòu)解析
            3.2.1 分子量測定
            3.2.2 糖醛酸含量測定
            3.2.3 剛果紅實(shí)驗(yàn)
            3.2.4 單糖組成
    4 本章小結(jié)
第三章 中藥多糖的陽離子化修飾及表征
    1 儀器與試劑
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
    2 實(shí)驗(yàn)與方法
        2.1 當(dāng)歸多糖的陽離子化修飾
        2.2 陽離子化當(dāng)歸多糖(ASP-PEI)的表征
            2.2.1 Zeta電位測定
            2.2.2 元素分析
            2.2.3 伯氨基含量測定
            2.2.4 傅立葉紅外光譜(FT-IR)分析
            2.2.5 核磁共振(NMR)分析
    3 結(jié)果與討論
        3.1 Zeta電位測定
        3.2 元素分析
        3.3 伯氨基含量測定
        3.4 傅立葉紅外光譜(FT-IR)分析
        3.5 核磁共振(NMR)分析
    4 本章小結(jié)
第四章 cASP-pHNF1A自組裝納米粒的制備、表征及細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率研究
    1 儀器與試劑
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
        1.3 主要溶液
    2 實(shí)驗(yàn)與方法
        2.1 cASP-pHNF1A自組裝納米粒的制備
            2.1.1 質(zhì)粒DNA的制備
            2.1.2 質(zhì)粒DNA的鑒定
            2.1.3 cASP-pHNF1A自組裝納米粒的制備
            2.1.4 cASP-pHNF1A自組裝納米粒攜帶基因能力的測定
        2.2 cASP-pHNF1A自組裝納米粒的表征
            2.2.1 Zeta電位測定
            2.2.2 粒徑測定
            2.2.3 形態(tài)觀察
            2.2.4 細(xì)胞毒性
        2.3 cASP-pHNF1A自組裝納米粒細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的研究
            2.3.1 cASP-pHNF1A自組裝納米粒細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的定性分析
            2.3.2 cASP-pHNF1A自組裝納米粒細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的定量分析
    3 結(jié)果與討論
        3.1 cASP-pHNF1A自組裝納米粒的制備
            3.1.1 質(zhì)粒DNA的鑒定
            3.1.2 cASP-pHNF1A自組裝納米粒攜帶基因能力的測定
        3.2 cASP-pHNF1A自組裝納米粒的表征
            3.2.1 Zeta電位測定
            3.2.2 粒徑測定
            3.2.3 形態(tài)觀察
            3.2.4 細(xì)胞毒性
        3.3 cASP-pHNF1A自組裝納米粒細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的研究
            3.3.1 cASP-pHNF1A自組裝納米粒細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的定性分析
            3.3.2 cASP-pHNF1A自組裝納米粒細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的定量分析
    4 本章小結(jié)
第五章 cASP-pHNF1A自組裝納米粒介導(dǎo)的體細(xì)胞重編程研究
    1 儀器與試劑
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
        1.3 主要溶液
    2 實(shí)驗(yàn)與方法
        2.1 人源包皮成纖維細(xì)胞(HFFs)的分離與培養(yǎng)
            2.1.1 HFFs細(xì)胞的原代培養(yǎng)
            2.1.2 HFFs細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
            2.1.3 HFFs細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇
        2.2 HFFs細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)的人源肝細(xì)胞(ihHeps)
        2.3 ihHeps的鑒定
            2.3.1 細(xì)胞形態(tài)變化
            2.3.2 免疫熒光反應(yīng)
            2.3.3 蛋白免疫印記(Western Blotting)
            2.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            2.3.5 吲哚菁綠(ICG)的攝取和分泌
            2.3.6 糖原的儲(chǔ)存
            2.3.7 低密度脂蛋白(LDL)的攝取
    3 結(jié)果與討論
        3.1 人源包皮成纖維細(xì)胞(HFFs)的分離與培養(yǎng)
        3.2 HFFs細(xì)胞重編程為人源肝細(xì)胞(ihHeps)
        3.3 ihHeps的鑒定
            3.3.1 免疫熒光反應(yīng)
            3.3.2 蛋白免疫印跡(Western Blotting)
            3.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            3.3.4 吲哚菁綠(ICG)的攝取和分泌
            3.3.5 糖原的儲(chǔ)存
            3.3.6 低密度脂蛋白(LDL)的攝取
    4 本章小結(jié)
全文總結(jié)與創(chuàng)新點(diǎn)
    一 全文總結(jié)
        1 中藥多糖的提取、分離、純化及結(jié)構(gòu)解析
        2 中藥多糖的陽離子化修飾及表征
        3 cASP-pHNF1A自組裝納米粒的制備、表征及細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率研究
        4 cASP-pHNF1A自組裝納米粒介導(dǎo)的體細(xì)胞重編程研究
    二 創(chuàng)新點(diǎn)
    三 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間已發(fā)表或完成的論文



本文編號：3705359