目的:肺癌是世界范圍導致最多人數死亡的癌癥,相關治療和診斷近年雖有所改善,但五年生存率依然不高。啟動子CpG島甲基化是基因表達調控的重要機制之一,腫瘤相關基因啟動子甲基化可影響其表達,一方面影響腫瘤生物學行為,另一方面也可能成為腫瘤的相關診斷標志。本課題通過數據庫和文獻對肺癌相關候選基因進行篩選,然后對這些基因的啟動子DNA甲基化情況進行分析和驗證,探討與肺癌相關的基因啟動子甲基化情況,為探討肺癌發(fā)病機制和尋找潛在肺癌診斷生物標志物提供實驗依據。方法:采用特異性定量甲基化PCR（qMSP）對非小細胞肺癌的癌組織、癌旁組織和遠端癌旁組織樣本進行肺癌相關基因啟動子甲基化水平的測試。并且結合TCGA數據庫的數據進行相關陽性基因啟動子甲基化的分析。以甲基化參考百分比（PMR）作為甲基化水平衡量標準。采用非參數秩和檢驗對三組樣本進行各基因啟動子甲基化水平檢測。最后對篩查的三個陽性基因進行相關細胞功能驗證,通過熒光素酶實驗檢測啟動子活性,采用5’-aza-deoxycytidine處理肺癌細胞系,檢測啟動子去甲基化對陽性基因表達水平的影響。結果:1、對肺癌相關基因進行甲基化引物檢測后,確定了22個... 

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
材料與方法
    1.實驗材料
        1.1 樣本收集及細胞株
        1.2 實驗器材
        1.3 主要試劑
    2.實驗方法
        2.1 樣本收集與處理
        2.2 樣本甲基化處理、檢測和統(tǒng)計分析
        2.3 細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代和凍存
        2.4 細胞轉染
        2.5 熒光素酶報告基因檢測
        2.6 5 ’-aza-deoxycytidine去甲基化處理
        2.7 熒光定量PCR
        2.8 生物信息分析
        2.9 數據統(tǒng)計與分析
實驗結果
    3.1 多個肺癌候選基因的篩選與基因甲基化檢測
    3.2 TNFRSF10C基因組間甲基化水平分析和TCGA數據庫分析
    3.3 PRKCDBP基因組間甲基化水平分析和TCGA數據庫分析
    3.4 EPAS1 基因組間甲基化水平分析和TCGA數據庫分析
    3.5 TNFRSF10C、PRKCDBP和 EPAS1 細胞功能實驗
討論
    1.TNFRSF10C甲基化與肺癌
    2.PRKCDBP甲基化與肺癌
    3.EPAS1 甲基化與肺癌
參考文獻
DNA甲基化與肺癌臨床診斷的研究進展
    參考文獻
致謝



本文編號：3698702