水稻、小麥是我國的主要糧食作物,在糧食生產和人民生活中占有重要地位。本論文以我國黑龍江、湖北和河北等地區(qū)大田生長的水稻、小麥為材料,采用nifH基因實時定量PCR、nifH基因變性梯度凝膠電泳、高通量測序、以及nifH基因反轉錄PCR結合變性梯度凝膠電泳等技術,系統(tǒng)探索了施用微生物肥料、不同作物品種、不同生育期等因素對水稻、小麥內生固氮菌nifH基因數量、優(yōu)勢類群、nifH基因活性的影響。主要研究結果如下:（1）施用生物肥料對水稻、小麥內生固氮菌nifH基因數量、固氮菌類群多樣性影響顯著。水稻根內、莖內、葉內nifH基因數量分別為（1.51~17.80）×108拷貝/g、（1.01~2.76）×107拷貝/g和（2.04~19.50）×106拷貝/g。與未施用生物肥料的對照處理相比,施用生物肥料后水稻根內nifH基因數量呈持平或降低趨勢,但莖、葉內nifH基因數量顯著增高,水稻內生固氮菌類群、優(yōu)勢類群都發(fā)生了顯著變化,小麥試驗與水稻結果趨勢相同�？傮w上優(yōu)勢類群有Azospirillum、Pseudomonas、Sinorhizobium、Methylocystis、Sphingomon... 

【文章頁數】：109 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 水稻、小麥是我國的主要糧食作物
    1.2 植物內生固氮菌
    1.3 水稻、小麥內生固氮菌多樣性研究國內外現狀
    1.4 固氮酶nifH基因及相關分子生物學研究方法
        1.4.1 變性梯度凝膠電泳(DGGE)
        1.4.2 實時熒光定量PCR(q PCR)
        1.4.3 高通量測序技術的發(fā)展與應用
    1.5 本文研究背景與意義
    1.6 技術路線
第二章 施用生物肥料對水稻、小麥內生固氮菌nifH基因數量及固氮菌類群多樣性的影響
    2.1 實驗材料
        2.1.1 供試樣品
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 田間栽培試驗
        2.2.2 樣品采集與處理
        2.2.3 樣品總DNA提取
        2.2.4 固氮酶nif H基因擴增與變性梯度凝膠電泳(DGGE)
        2.2.5 固氮酶nif H基因實時熒光定量PCR分析
        2.2.6 固氮酶nifH基因的高通量測序研究
    2.3 結果分析
        2.3.1 樣品總DNA提取與nif H基因PCR擴增
        2.3.2 施用生物肥料對水稻、小麥內生固氮菌nifH基因數量的影響
        2.3.3 施用生物肥料對水稻、小麥內生固氮菌優(yōu)勢類群的影響
        2.3.4 施用生物肥料對水稻、小麥內生固氮菌類群結構的影響
    2.4 小結與討論
第三章 不同水稻品種對內生固氮菌nifH基因數量及固氮菌類群多樣性的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 供試樣品
    3.2 實驗方法
        3.2.1 田間栽培試驗
        3.2.2 樣品采集與處理
        3.2.3 樣品總DNA提取
        3.2.4 固氮酶nif H基因擴增與變性梯度凝膠電泳(DGGE)
        3.2.5 固氮酶nif H基因實時熒光定量PCR分析
        3.2.6 固氮酶nifH基因的高通量測序研究
    3.3 結果分析
        3.3.1 不同水稻品種對內生固氮菌nifH基因數量的影響
        3.3.2 不同水稻品種對內生固氮菌優(yōu)勢類群的影響
        3.3.3 不同水稻品種對內生固氮菌類群結構的影響
    3.4 小結與討論
第四章 不同生育期水稻、小麥內生固氮菌nifH基因數量及固氮菌類群多樣性比較
    4.1 實驗材料
        4.1.1 供試樣品
    4.2 實驗方法
        4.2.1 田間栽培試驗
        4.2.2 樣品采集與處理
        4.2.3 樣品總DNA提取
        4.2.4 固氮酶nif H基因擴增與變性梯度凝膠電泳(DGGE)
        4.2.5 固氮酶nif H基因實時熒光定量PCR分析
        4.2.6 固氮酶nifH基因的高通量測序研究
    4.3 結果分析
        4.3.1 不同生育期水稻內生固氮菌nifH基因數量變化
        4.3.2 不同生育期水稻內生固氮菌優(yōu)勢類群變化
        4.3.3 不同生育期水稻、小麥內生固氮菌類群結構變化
    4.4 小結與討論
第五章 水稻、小麥內生固氮菌固氮酶nifH基因活性分析
    5.1 實驗材料
        5.1.1 供試樣品
    5.2 實驗方法
        5.2.1 樣品采集與處理
        5.2.2 樣品總RNA的提取
        5.2.3 cDNA文庫的建立
        5.2.4 固氮酶nif H基因擴增與變性梯度凝膠電泳(DGGE)
    5.3 結果分析
        5.3.1 樣品總RNA的提取
        5.3.2 水稻、小麥內生固氮菌nifH基因活性
    5.4 小結與討論
第六章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
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本文編號：3697634