虹鱒（Oncorhynchus mykiss）為典型的冷水性魚類,因肉質(zhì)鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富等優(yōu)點(diǎn),已成為我國(guó)鮭鱒魚類主要養(yǎng)殖品種。三倍體雌性虹鱒性腺發(fā)育異常,不能正常產(chǎn)生配子進(jìn)行繁殖,這不僅能有效減少卵巢發(fā)育階段所需要的能量損失,還避免了在產(chǎn)卵季節(jié)導(dǎo)致的生長(zhǎng)停滯、魚肉質(zhì)量下降和高死亡率等情況的發(fā)生,因此,頗受養(yǎng)殖者青睞,全雌三倍體虹鱒也逐漸成為養(yǎng)殖重點(diǎn)。目前國(guó)內(nèi)外已從多方面對(duì)三倍體雌性虹鱒不育的機(jī)制進(jìn)行研究,但還沒(méi)有從生殖細(xì)胞角度進(jìn)行探索,因此,本研究通過(guò)原始生殖細(xì)胞（PGCs）標(biāo)記基因Vasa及Dead end（Dnd）,對(duì)不同倍性雌性虹鱒胚胎及性腺分化關(guān)鍵時(shí)期進(jìn)行研究,分析兩種基因在二倍體與三倍體雌性虹鱒中的表達(dá)量及表達(dá)位置變化,從生殖細(xì)胞角度探究三倍體雌性虹鱒不育原因,為進(jìn)一步研究三倍體雌性虹鱒性腺敗育機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.通過(guò)克隆擴(kuò)增得到虹鱒Dnd基因序列長(zhǎng)為1,231 bp,共編碼364個(gè)氨基酸。氨基酸多重比對(duì)顯示虹鱒Dnd與大鱗大馬哈同源性最高為98.36%,與其他硬骨魚相似度在97.81-44.4%之間。Dnd在進(jìn)化上非常保守,系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)顯示虹鱒Dnd在硬骨... 

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 虹鱒概述
        1.1.1 虹鱒簡(jiǎn)介
        1.1.2 虹鱒三倍體人工誘導(dǎo)
    1.2 魚類原始生殖細(xì)胞概述
        1.2.1 魚類PGCs特征
        1.2.2 魚類PGCs起源
        1.2.3 魚類PGCs遷移
        1.2.4 魚類PGCs可視化
        1.2.5 魚類PGCs應(yīng)用
        1.2.6 魚類PGCs標(biāo)記基因
    1.3 Vasa基因研究進(jìn)展
        1.3.1 Vasa基因結(jié)構(gòu)及序列特征
        1.3.2 Vasa基因在魚類發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)
    1.4 Dnd基因研究進(jìn)展
        1.4.1 Dnd基因結(jié)構(gòu)及作用機(jī)制
        1.4.2 Dnd基因功能
        1.4.3 Dnd基因在魚類發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)
    1.5 本研究目的及意義
第2章 虹鱒Dnd基因克隆及序列特征分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑盒及藥品
        2.1.4 相關(guān)試劑配制
    2.2 引物序列
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 總RNA提取
        2.3.2 RNA反轉(zhuǎn)為cDNA
        2.3.3 PCR擴(kuò)增基因cDNA片段
        2.3.4 PCR產(chǎn)物純化及回收
        2.3.5 產(chǎn)物連接轉(zhuǎn)化陽(yáng)性克隆篩選
        2.3.6 測(cè)序
        2.3.7 虹鱒Dnd基因序列分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 虹鱒Dnd基因cDNA克隆
        2.4.2 虹鱒Dnd氨基酸生物信息學(xué)分析
        2.4.3 虹鱒Dnd氨基酸序列比對(duì)
        2.4.4 系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第3章 Vasa及 Dnd基因在不同倍性虹鱒中的表達(dá)及定位研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及采集方法
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑及配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        3.2.2 Western blot
        3.2.3 免疫組織化學(xué)切片
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 Vasa及 Dnd基因在不同倍性雌性虹鱒成體各組織中表達(dá)分析
        3.3.2 Vasa及 Dnd基因在不同倍性虹鱒胚胎發(fā)育階段表達(dá)分析
        3.3.3 Vasa及 Dnd基因在不同倍性雌性虹鱒各發(fā)育階段性腺中表達(dá)分析
        3.3.4 Vasa及 Dnd蛋白在不同倍性雌性虹鱒各發(fā)育階段性腺中的定位研究
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[3]半滑舌鰨生殖細(xì)胞標(biāo)記基因的克隆、表達(dá)及調(diào)控區(qū)功能驗(yàn)證[D]. 黃進(jìn)強(qiáng).中國(guó)海洋大學(xué) 2014
[4]基于vasa/dnd基因標(biāo)記的兩種海水魚原始生殖細(xì)胞發(fā)生發(fā)育的研究[D]. 林帆.中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2013
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碩士論文
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[3]中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）生殖相關(guān)基因的克隆及其表達(dá)模式研究[D]. 王敏.蘇州大學(xué) 2015
[4]尼羅羅非魚dnd和aldhla2基因在生殖細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中的功能研究[D]. 方玲玲.西南大學(xué) 2014
[5]牙鲆vasa基因的克隆、表達(dá)分析及其啟動(dòng)子調(diào)控的GFP報(bào)告載體構(gòu)建[D]. 吳曉萌.中國(guó)海洋大學(xué) 2013
[6]稀有鮑鯽dead end基因的克隆及其功能研究[D]. 段俊丹.華中師范大學(xué) 2013
[7]二、三和四倍體虹鱒Oncorhynchus mykiss精子生物學(xué)研究[D]. 楊翟平.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[8]虹鱒卵巢發(fā)育及相關(guān)系數(shù)研究[D]. 蔡�，�.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[9]三倍體虹鱒規(guī)模制種技術(shù)研究[D]. 王太.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3688197