目的研究發(fā)現(xiàn)頭頸鱗癌、甲狀腺乳頭狀癌、胃癌、結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤中Stomatin樣蛋白2（STOML2）基因高表達。通過慢病毒技術(shù)敲低PC3細(xì)胞STOML2基因,觀測其對列腺癌細(xì)胞增殖、遷移和線粒體膜電位及Erk和Akt通路的影響。方法用PEI法轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞制作能敲低STOML2基因（shDNA-STOML2）及其隨機序列對照（SHCON）的慢病毒,將其分別感染前列腺癌細(xì)胞PC3。以未轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞PC3為空白對照組,以轉(zhuǎn)染隨機序列為陰性對照組,以轉(zhuǎn)染shDNA-STOML2慢病毒載體為敲低組。用免疫熒光顯微鏡和Western blot檢測感染效率和STOML2蛋白表達水平。MTT實驗、細(xì)胞劃痕愈合實驗檢測對PC3細(xì)胞增殖和遷移的影響。流式細(xì)胞術(shù)及Western blot檢測敲低STOML2基因后對PC3細(xì)胞線粒體膜電位以及Erk、Akt通路的影響。結(jié)果成功構(gòu)建了shDNA-STOML2和隨機序列SHCON兩種慢病毒質(zhì)粒。包裝的慢病毒感染PC3細(xì)胞感染效率約100%,陰性對照組較敲低組的STOML2/β-actin相對表達水平明顯升高（P<0.01）,提示模型制作成... 

【文章來源】：醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報. 2020,33(10)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
0 引 言
1 材料與方法
    1.1 主要試劑和儀器
    1.2 細(xì)胞系及細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 慢病毒載體構(gòu)建及鑒定
    1.4 質(zhì)粒提取和慢病毒包裝
    1.5 PC3細(xì)胞感染及分組
    1.6 MTT實驗檢測PC3細(xì)胞的增殖能力
    1.7 細(xì)胞劃痕愈合實驗檢測PC3細(xì)胞的體外遷移能力
    1.8 流式細(xì)胞儀檢測PC3細(xì)胞線粒體膜電位水平
    1.9 Western blot檢測前列腺癌PC3細(xì)胞中STOML2、p-erk、Erk和p-akt、Akt蛋白的表達
    1.10 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié) 果
    2.1 敲低STOML2基因在人前列腺癌PC3細(xì)胞株的建立和鑒定
    2.2 敲低STOML2基因組STOML2蛋白的表達
    2.3 敲低STOML2基因?qū)θ饲傲邢侔㏄C3細(xì)胞增殖能力增強
    2.4 敲低STOML2基因后人前列腺癌PC3細(xì)胞體外遷移能力降低
    2.5 敲低STOML2基因后人前列腺癌PC3線粒體膜電位的水平升高
    2.6 Western blot檢測各組p-erk、Erk、p-akt和Akt結(jié)果
3 討 論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]G蛋白耦聯(lián)受體C家族6組A亞型在前列腺癌細(xì)胞增殖和凋亡中的作用[J]. 孫心旖,盛彬,陳瑤,李莉,楊建一,杜圣家,劉銘.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報. 2019(02)
[2]長鏈非編碼RNA在前列腺癌中的作用及研究進展[J]. 郭倚天,許斌,陳明.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報. 2017(02)
[3]ATP檸檬酸裂解酶表達下調(diào)對前列腺癌細(xì)胞生長及凋亡影響的研究[J]. 孔海瑞,耿申,楊杰,曾方銀.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報. 2017(01)

碩士論文
[1]STOML2蛋白在前列腺癌與前列腺增生中的差異表達及意義[D]. 陳寧.華北理工大學(xué) 2016



本文編號：3640360