目的:1.通過(guò)生物信息學(xué)網(wǎng)站預(yù)測(cè)靶向Sp110的microRNA（miRNA）。2.通過(guò)在THP-1細(xì)胞中檢測(cè)miRNA本底水平進(jìn)一步篩選miRNA。3.應(yīng)用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-6857-3p和Sp110存在靶向關(guān)系。4.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)研究miR-6857-3p對(duì)Sp110的調(diào)控作用。5.研究miR-6857-3p對(duì)卡介苗感染的巨噬細(xì)胞凋亡的影響。方法:1.用生物信息學(xué)網(wǎng)站（TargetScan、miRDB和miRTarBase）預(yù)測(cè)可能和Sp110具有靶向關(guān)系的miRNA（miR-6857-3p、miR-19a-5p、miR-4772-3p、miR-4659-5p和miR-5696）。2.提取人巨噬細(xì)胞（THP-1細(xì)胞）中的總RNA,將miRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,應(yīng)用qPCR技術(shù)檢測(cè)先前預(yù)測(cè)的5種miRNA的本底表達(dá)水平,采用2^-△ct法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量,篩選表達(dá)量最高的3種miRNA（miR-6857-3p、miR-4659-5p和miR-4772-3p）進(jìn)行雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)。3.從數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取miR-6857-3p、miR-4659... 

【文章來(lái)源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Sp110基因的研究進(jìn)展Figure1ResearchprogressofSp110gene

miR-6857-3p對(duì)人巨噬細(xì)胞Sp110基因調(diào)控的功能學(xué)研究3圖2Mtb感染巨噬細(xì)胞后miRNA及Sp110部分作用機(jī)制圖Figure2PartialmechanismofmiRNAandSp110afterMtbinfectionofmacrophages5.miR-6857-3p和Sp110基因的研究我們發(fā)現(xiàn)很多miRNA的異常表達(dá)都可能調(diào)控基因的表達(dá)，并在結(jié)核病的產(chǎn)生、發(fā)展及宿主細(xì)胞抗結(jié)核反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。我們通過(guò)mirbase、TargetScan等數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)出可能靶向Sp110基因的miR-6857-3p、miR-19a-5p、miR-4772-3p、miR-4659-5p和miR-5696，之后實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，THP-1細(xì)胞株中miR-4772-3p、miR-4659-5p和miR-6857-3p的本底表達(dá)水平較高，并且miR-6857-3p的表達(dá)水平最高，目前miR-6857-3p和Sp110基因是否存在靶向調(diào)控關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)我們通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證miR-6857-3p和Sp110之間是否存在靶向關(guān)系，并且通過(guò)將化學(xué)合成的小分子miRNAmimic及inhibitor導(dǎo)入THP-1細(xì)胞，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，研究miR-6857-3p對(duì)Sp110基因的調(diào)控作用，這可能為將來(lái)針對(duì)結(jié)核病的潛在治療干預(yù)提供有用的信息。

miR-6857-3p對(duì)人巨噬細(xì)胞Sp110基因調(diào)控的功能學(xué)研究163.結(jié)果3.1預(yù)測(cè)靶向Sp110的miRNA為了預(yù)測(cè)靶向Sp110基因的miRNA，我們使用了TargetScan、miRDB和miRTarBase預(yù)測(cè)網(wǎng)站進(jìn)行聯(lián)合分析（見(jiàn)圖3）。由于三個(gè)網(wǎng)站交集數(shù)量較少，并且不同數(shù)據(jù)庫(kù)使用的算法及收錄的miRNA不同，各數(shù)據(jù)庫(kù)之間的預(yù)測(cè)結(jié)果具有很大差異，因此我們篩選至少在兩個(gè)網(wǎng)站中都預(yù)測(cè)的miRNA，通過(guò)兩者間種子區(qū)域匹配方式及在miRTarBase數(shù)據(jù)庫(kù)中是否已進(jìn)行驗(yàn)證，我們最終認(rèn)為miR-6857-3p、miR-19a-5p、miR-4772-3p、miR-4659-5p和miR-5696可能靶向作用于Sp110基因。并且在TargetScan數(shù)據(jù)庫(kù)中分別找出其與Sp110基因的結(jié)合位點(diǎn)（見(jiàn)圖4）。其中miR-4659-5p、miR-4772-3p和miR-19a-5p在miRTarBase網(wǎng)站中顯示已通過(guò)NGS測(cè)序技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證（見(jiàn)圖5），但證據(jù)不夠充分，因此還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。圖33個(gè)預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)聯(lián)合韋恩圖Figure3JointWaynediagramofthreepredictiondatabases圖4預(yù)測(cè)的5個(gè)miRNA與Sp110基因的結(jié)合位點(diǎn)Figure4PredictedbindingsitesofthefivemiRNAstotheSp110gene

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]新疆地區(qū)2006—2016年肺結(jié)核報(bào)告發(fā)病和死亡情況分析[J]. 趙珍,陳鵬,依帕爾·艾海提,劉年強(qiáng).  中國(guó)公共衛(wèi)生. 2018(11)



本文編號(hào)：3621292