本文關(guān)鍵詞：大葉落地生根KdSAHH基因功能鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase, SAHH)廣泛存在于生物體內(nèi),是已知的唯一能夠水解S-腺苷-L-高半胱氨酸(S-adenosyl-L-homocysteine, SAH)成半胱氨酸(Hcy)和腺苷(Ado)的酶。SAH作為轉(zhuǎn)甲基反應(yīng)的抑制劑,與S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine, SAM,體內(nèi)甲基供體)的比值常用來(lái)作為衡量植物整體甲基化水平的重要指標(biāo)。在該研究中,根據(jù)已知的大葉落地生根(Kalanchoe daigremontiana) KdSAHH基因序列(GenBank登錄號(hào)：KF953475),對(duì)該基因進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析、干旱表達(dá)分析以及煙草轉(zhuǎn)化,以初步鑒定KdSAHH基因的功能,為后續(xù)全面深入研究該基因提供一定的借鑒與參考。通過(guò)研究,得到如下結(jié)論：1.構(gòu)建了亞細(xì)胞定位表達(dá)載體3302Y-KdSAHH,利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)化法注射健康生長(zhǎng)三周大小的本生煙草葉片,暗培養(yǎng)48 h后在激光共聚焦顯微鏡下觀察蛋白的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,黃色熒光在細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核中均有分布,表明大葉落地生根SAHH蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核。2.對(duì)健康生長(zhǎng)的大葉落地生根植株進(jìn)行自然干旱處理,分別在土壤相對(duì)含水量達(dá)到20%、10%、3%時(shí)的三個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣,通過(guò)半定量RT-PCR分析KdSAHH基因的表達(dá)模式,結(jié)果顯示,隨著干旱脅迫程度的加重,KdSAHH的表達(dá)量逐漸升高,表明該基因與抗旱性相關(guān)。3.構(gòu)建了植物超表達(dá)載體pZH01-KdSAHH,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)法轉(zhuǎn)化野生型煙草W38,經(jīng)過(guò)誘芽、生根得到煙草再生植株,對(duì)再生煙草分別進(jìn)行載體HPT基因片段及目的基因KdSAHH的陽(yáng)性檢測(cè),結(jié)果顯示共獲得9株陽(yáng)性植株。4.用20%的PEG6000對(duì)轉(zhuǎn)KdSAHH煙草和野生型煙草進(jìn)行模擬干旱處理,分別在0h,12h和24 h取樣,測(cè)定相關(guān)生理指標(biāo)。結(jié)果顯示,在PEG6000處理的24 h,兩種煙草均表現(xiàn)出了明顯的失水癥狀,轉(zhuǎn)KdSAHH煙草萎蔫程度較輕,上端仍有部分葉片保持挺立,而野生型煙草所有葉片均表現(xiàn)出明顯的失水癥狀。與野生型煙草相比,轉(zhuǎn)基因煙草葉片RWC與Chl含量下降程度較輕,兩種煙草的葉片RWC在24 h差異顯著(P0.05),Chl含量在12與24h均差異顯著(P0.05),表明在干旱脅迫下,轉(zhuǎn)基因煙草能夠保持相對(duì)穩(wěn)定的代謝。兩種煙草在干旱脅迫下產(chǎn)生的MDA含量均有所增加,相比之下,野生型煙草的上升程度較大,在24 h兩者差異顯著(P0.05),表明轉(zhuǎn)基因煙草膜脂過(guò)氧化程度較輕,受傷害小。兩種煙草的SOD含量與POD含量均呈明顯的上升趨勢(shì),相比之下,野生型煙草產(chǎn)生了更多的SOD和POD。兩者的POD含量在12與24 h差異顯著(P0.05),SOD含量則無(wú)明顯差異。分析可能是因?yàn)檗D(zhuǎn)基因煙草抗旱性增強(qiáng),故而未產(chǎn)生較多的活性氧。
【關(guān)鍵詞】：大葉落地生根 KdSAHH 亞細(xì)胞定位 表達(dá)分析 干旱脅迫
【學(xué)位授予單位】：北京林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q943.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 縮寫(xiě)詞10-12
• 1 引言12-24
• 1.1 S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶基因13-16
• 1.1.1 DNA甲基化與表觀遺傳13-14
• 1.1.2 SAHH的研究概況14-16
• 1.2 大葉落地生根簡(jiǎn)介16-18
• 1.2.1 大葉落地生根的觀賞價(jià)值16
• 1.2.2 大葉落地生根的藥用價(jià)值16-17
• 1.2.3 景天酸代謝模型17
• 1.2.4 胎生繁殖植物模型17-18
• 1.3 轉(zhuǎn)基因技術(shù)18-19
• 1.3.1 轉(zhuǎn)基因技術(shù)簡(jiǎn)介18
• 1.3.2 常見(jiàn)轉(zhuǎn)基因方法18-19
• 1.4 植物抗旱生理19-22
• 1.4.1 干旱對(duì)植物生長(zhǎng)的影響20
• 1.4.2 抗旱相關(guān)生理生化指標(biāo)20-22
• 1.4.2.1 干旱脅迫對(duì)相對(duì)含水量、葉水勢(shì)的影響20
• 1.4.2.2 干旱脅迫對(duì)活性氧代謝的影響20-21
• 1.4.2.3 干旱脅迫對(duì)丙二醛代謝的影響21
• 1.4.2.4 干旱脅迫對(duì)光合作用的影響21-22
• 1.5 研究目的、內(nèi)容與技術(shù)路線22-24
• 1.5.1 研究目的22
• 1.5.2 研究?jī)?nèi)容22-23
• 1.5.3 技術(shù)路線23-24
• 2 材料與方法24-33
• 2.1 試驗(yàn)材料24-25
• 2.1.1 植物材料24
• 2.1.2 生化試劑24
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備24
• 2.1.4 培養(yǎng)基的配制24-25
• 2.2 亞細(xì)胞定位25-27
• 2.2.1 引物設(shè)計(jì)25
• 2.2.2 亞細(xì)胞定位載體3302Y-KDSAHH構(gòu)建25-26
• 2.2.3 EHA105農(nóng)桿菌感受態(tài)制備26-27
• 2.2.4 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)27
• 2.2.5 本生煙草瞬時(shí)表達(dá)27
• 2.3 干旱脅迫下KDSAHH的表達(dá)分析27-29
• 2.3.1 大葉落地生根自然干旱處理27
• 2.3.2 大葉落地生根cDNA的合成27-28
• 2.3.3 引物設(shè)計(jì)28
• 2.3.4 半定量RT-PCR28-29
• 2.4 煙草轉(zhuǎn)化29-31
• 2.4.1 植物表達(dá)載體PZH01-KDSAHH構(gòu)建29
• 2.4.2 煙草無(wú)菌苗種植29
• 2.4.3 煙草葉盤(pán)法轉(zhuǎn)化29-30
• 2.4.4 再生植株陽(yáng)性檢測(cè)30-31
• 2.5 轉(zhuǎn)基因煙草植株干旱脅迫下生理指標(biāo)測(cè)定31-33
• 2.5.1 葉片相對(duì)含水量31-32
• 2.5.2 葉綠素含量32
• 2.5.3 丙二醛含量32
• 2.5.4 過(guò)氧化物酶含量32-33
• 3 結(jié)果與分析33-43
• 3.1 KDSAHH的亞細(xì)胞定位33-34
• 3.1.1 KDSAHH的亞細(xì)胞定位結(jié)果33-34
• 3.1.2 小結(jié)34
• 3.2 干旱脅迫下KDSAHH的表達(dá)分析34-36
• 3.2.1 干旱脅迫下KDSAHH的表達(dá)34-35
• 3.2.2 小結(jié)35-36
• 3.3 植物表達(dá)載體PZH01-KDSAHH的構(gòu)建及煙草轉(zhuǎn)化36-39
• 3.3.1 植物表達(dá)載體PZH01-KDSAHH的構(gòu)建36
• 3.3.2 煙草轉(zhuǎn)化36-37
• 3.3.3 再生植株陽(yáng)性檢測(cè)37-38
• 3.3.4 小結(jié)38-39
• 3.4 干旱脅迫下的生理指標(biāo)分析39-43
• 3.4.1 干旱脅迫下的生理表現(xiàn)39
• 3.4.2 干旱脅迫下的生理指標(biāo)39-41
• 3.4.3 小結(jié)41-43
• 4 總結(jié)與展望43-45
• 4.1 總結(jié)43
• 4.2 展望43-45
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 個(gè)人簡(jiǎn)介51-53
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介53-55
• 致謝55

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 劉建華;大葉落地生根是營(yíng)養(yǎng)繁殖的好材料[J];生物學(xué)通報(bào);2002年10期

2 游義霞;黃先忠;鄭銀英;崔百明;;大葉落地生根STM基因植物表達(dá)載體構(gòu)建及煙草轉(zhuǎn)化[J];石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年03期

3 ;[J];;年期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王一U，

本文編號(hào)：360750