為研究不同溫度脅迫下藥用蒲公英最適內(nèi)參基因與溫度響應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá),分別以低溫（4℃）和高溫（38℃）脅迫0、3、6、12、24和48 h共12個(gè)處理的葉片為材料,選取10個(gè)候選內(nèi)參基因18S、EF1α、TUB、40S、GAPDH、β-actin、ACT11、TUA、60S和SKIP,利用RT-qPCR技術(shù)以及geNorm、NormFinder和BestKeeper軟件評(píng)價(jià)其穩(wěn)定性。利用篩選出的最適內(nèi)參基因?qū)λ幱闷压?2個(gè)溫度響應(yīng)基因（AP2/ERF、Dof、ICE1、MYB、b ZIP、NTL6、HSF、Gols、HSP、NAC、XCT和WRKY）的表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。結(jié)果顯示:溫度脅迫下藥用蒲公英最適內(nèi)參基因?yàn)?8S和GAPDH;藥用蒲公英AP2/ERF、HSF、Glos、HSP、NAC、XCT基因在低溫和高溫脅迫下均為先上調(diào)后下調(diào)表達(dá),bZIP、NTL6在溫度脅迫下波動(dòng)變化,Dof、ICE1、MYB在低溫脅迫下先上調(diào)后下調(diào)表達(dá),高溫脅迫下持續(xù)下調(diào)表達(dá),WRKY在高溫脅迫下表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于低溫脅迫。依據(jù)基因表達(dá)量推測(cè),藥用蒲公英低溫和高溫脅迫的響應(yīng)機(jī)制存在差異,AP2/ERF、D... 

【文章來源】：園藝學(xué)報(bào). 2020,47(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：12 頁

【部分圖文】：

藥用蒲公英RNA(A）和候選內(nèi)參基因瓊脂糖電泳圖譜（B)

CT值是反映基因表達(dá)豐度的重要參數(shù)。對(duì)各處理10個(gè)候選內(nèi)參基因的CT值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)（圖2),10個(gè)基因CT值在17～38之間，18S和GAPDH的CT比較小，其基因表達(dá)豐度高，ACT11、TUA、60S、SKIP的CT比較大，基因表達(dá)豐度低，EF1α、TUB、40S、β-actin的CT處于中間范圍。簡單從CT值可以看出18S在不同脅迫時(shí)期表達(dá)較為穩(wěn)定，且表達(dá)較高，可以作為內(nèi)參基因。2.3 藥用蒲公英溫度脅迫下候選內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性

geNorm軟件V值（配對(duì)變異值，Pairwise variation value）可以確定篩選內(nèi)參基因的數(shù)量，M值（表達(dá)穩(wěn)定值，Expression stability）可以判斷基因穩(wěn)定性，M值越小越穩(wěn)定。由圖3,A可知，配對(duì)變異值V2/3小于0.15，所以2個(gè)基因作為溫度脅迫下內(nèi)參基因組合便可滿足要求。由圖3,B可知，M值以18S和GAPDH最小，穩(wěn)定性最好，因此選擇18S和GAPDH組合作為藥用蒲公英溫度脅迫下內(nèi)參基因。2.3.2 NormFinder

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3605133