蒲公英甾醇具有抗乳腺炎及抑制血管炎癥的作用,由于其在蒲公英中含量低,如何提高蒲公英中蒲公英甾醇含量具有重要意義。本試驗以丹東蒲公英（Taraxacum antungense Kitag.）為試材,研究茉莉酸甲酯（MeJA）對丹東蒲公英總三萜含量及生物合成途徑關鍵酶基因表達量影響。同時,克隆丹東蒲公英甾醇生物合成第一個關鍵酶鯊烯合酶（TaSS）基因,獲得了TaSS基因過表達株系,確定TaSS基因在蒲公英甾醇生物合成中的功能。克隆TaSS基因啟動子片段并分析該基因啟動子順式作用元件。本試驗克隆了茉莉酸信號途徑核心轉錄因子TaMYC2并篩選出TaMYC2基因過表達的毛狀根系,初步分析TaMYC2在蒲公英甾醇生物合成途徑中的功能。主要結果如下:1.分析生物合成途徑關鍵基因在茉莉酸甲酯誘導下的表達模式,結果表明TaFPS1、TaFPS2、TaHMGR3、TaMYC2、TaMVD、TaHDR和TaSS在處理前期表達量上調,后期表達量受抑制。處理期間總三萜含量均高于對照,并且在處理3 h達到最高值,表明茉莉酸甲酯可以提高相關基因表達量來促進蒲公英總三萜化合物含量積累。2.根據丹東蒲公英轉錄組數(shù)據,克... 

【文章來源】：沈陽農業(yè)大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

蒲公英甾醇結構

結果與分析S 基因克隆與表達載體鑒定實驗室前期測序的丹東蒲公英轉錄組數(shù)據，利用 Primer 5.反轉錄的丹東蒲公英葉片 cDNA 為模板，擴增 TaSS 目的片T 克隆載體，轉化大腸桿菌，送公司測序。測序結果顯示，出 1269bp 的片段，包含一個開放閱讀框（ORF）大小為 1中 TaSS 基因相似度為 99%，說明成功克隆出 TaSS 基因。位點，選擇 BamH I 和 Sac I 分別為上下游酶切位點，對目行酶切，純化，連接，測序。測序結果顯示，成功構建 pR。利用凍融法將 pRI101-SS 轉化根癌農桿菌 GV3103。B

沈陽農業(yè)大學碩士學位論文Eleutherococcus senticosus），大豆（Glycine max），柿（Diospyros kaki）和 蒺苜蓿（Medicago truncatula）鯊烯合酶氨基酸序列的同源性 98.56%， 92.81%，.73%， 87.28%， 81.45%， 82.20%， 81.20%， 81.31%， 80.98%和 80.10%。SS 不論是核苷酸序列還是氨基酸序列都與其他植物鯊烯合酶同源性極高，說鯊烯合酶在不同植物中是非常保守的。選擇 NCBI 上已經公布的鯊烯合酶序列選擇 11 個植物鯊烯合酶序列構建系進化樹分別是：橡膠草（AXU93510.1），雪蓮（APG29293.1），青蒿（AAR20329.1），甘菊（AIX97193.1），大豆（NP_001236365.2），煙草（AWK49044.1），茶樹XP_028059258.1），黃辣椒（PHU10676.1），人參（ACV88718.1），黃芪ALA23415.1），擬南芥（AAD00296.1）。發(fā)現(xiàn) TaSS 與菊科植物雪蓮，青蒿，甘菊同源性較高，與橡膠草屬于同一分枝，結果見圖 8。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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