目的建立單核細(xì)胞特異性KCNQ1基因條件敲除小鼠模型,在此基礎(chǔ)上構(gòu)建痛風(fēng)氣囊模型,探討KCNQ1參與痛風(fēng)發(fā)病的具體致炎機(jī)制。方法利用條件性基因敲除技術(shù)flop^-/--loxp系統(tǒng)構(gòu)建KCNQ1^flop/flop小鼠,與單核細(xì)胞內(nèi)特異性表達(dá)cre酶的Lyz2-cre⁺工具鼠進(jìn)行雜交,構(gòu)建單核細(xì)胞內(nèi)KCNQ1基因條件敲除小鼠（cKO小鼠）,進(jìn)行繁殖及鑒定其子代小鼠基因型。western blot檢測KCNQ1蛋白在單核細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),驗(yàn)證目的基因KCNQ1在單核細(xì)胞表達(dá)降低或無。cKO純合小鼠為實(shí)驗(yàn)組,其野生型（WT）的同窩小鼠為對照組,每組小鼠6只,均為8周齡的健康雄性小鼠,檢測兩組小鼠血尿酸、肝功、腎功、血糖、血脂等生化指標(biāo)。構(gòu)建小鼠痛風(fēng)氣囊模型,整體水平觀察炎癥反應(yīng),收集滑膜液,滑膜,血清等樣本,滑膜液離心后收集沉淀,PBS重懸,炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)以及姬姆薩染色,ELISA法檢測滑膜液及血清中炎癥因子IL-1β水平,HE染色觀察兩組小鼠滑膜病理形態(tài)學(xué)的變化,免疫組化檢測滑膜中IL-1β、IL-18、MCP-1的表達(dá)。取兩種基因... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

五n習(xí)戶Ox/fl今LyzZ一cre+小鼠基因型鑒定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1 KCNQ1 基因條件性敲除小鼠模型構(gòu)建成功通過對子代小鼠基因型鑒定發(fā)現(xiàn)，KCNQ1flox/flox小鼠僅 583 bp 出有條帶，KCNQ1flox/+小鼠在 583bp 和 480bp 出同時(shí)有條帶，KCNQ1+/+僅在 480bp 出有條帶，如圖 1A 所示。圖 1B 結(jié)果顯示：Lyz2-Cre+小鼠在 700 bp 處有條帶，Lyz2-Cre-小鼠在僅350 bp 處有條帶。其中 157 號(hào)小鼠的基因?yàn)?KCNQ1flox/flox/Lyz2-Cre+，分離小鼠的原代單核細(xì)胞，LCM 進(jìn)行體外誘導(dǎo)分化為單核/巨噬細(xì)胞，WesternBlot 結(jié)果顯示（圖 2）：KO 小鼠單核/巨噬細(xì)胞中 KCNQ1 表達(dá)明顯降低，提示通過 Lyz2-Cre，單核/巨噬細(xì)胞中 KCNQ1 基因被敲除。表明單核細(xì)胞 KCNQ1 條件敲除小鼠（KCNQ1cKO）模型構(gòu)建成功。

雙折光的晶體狀，檢測 PH 值為 7.2（圖4）。 2 KCNQ1 基因?qū)ρ仔约?xì)胞趨化的影響尿酸鹽晶體刺激 8 小時(shí)后，小鼠滑膜液中炎性細(xì)胞數(shù)量增多，但 KO+MSU 和WT+MSU 兩組小鼠之間炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)的差異不明顯（6.04×106±2.58×106VS 5.56×106± 2.56×106個(gè)，P=0.698，P＞0.05，圖 5） 圖 4 尿酸鹽晶體的偏振光顯微鏡下形態(tài)（×2

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]NALP3炎性體與非感染性炎癥疾病[J]. 童玉娜,何婭妮.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2011(04)
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博士論文
[1]原發(fā)性痛風(fēng)易感基因KCNQ1基因的單核苷酸多態(tài)性對基因表達(dá)及單核細(xì)胞功能影響的研究[D]. 王靜.青島大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3541117