神農(nóng)香菊（Chrysanthemum indicum var.aroma）ticum是菊科（Compositae）菊屬（Chrysanthemum）的多年生草本植物,植株香氣濃郁,分泌物主要化學(xué)成分為龍腦、α-側(cè)柏酮、β-側(cè)柏酮等萜類化合物,是一種珍貴的香料植物。DXR基因是萜類物質(zhì)合成MEP途徑的一個關(guān)鍵的限速酶,對下游MEP的合成具有重要影響。為探究并完善神農(nóng)香菊萜類物質(zhì)合成通路關(guān)鍵酶基因的表達(dá)方式,本研究以神農(nóng)香菊為實(shí)驗(yàn)材料,預(yù)測并分析了其萜類物質(zhì)合成通路的關(guān)鍵酶基因,克隆并分析了神農(nóng)香菊萜類合酶（CiDXR）基因及其啟動子。研究結(jié)果如下:在經(jīng)過茉莉酸甲酯處理后的神農(nóng)香菊轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中,共篩選到21個上調(diào)表達(dá)的萜類物質(zhì)合成通路基因,未發(fā)現(xiàn)下調(diào)表達(dá)的基因。GO生物學(xué)過程注釋到的主要集中在氧化還原過程、代謝過程、裂解酶、解旋酶和萜烯合酶活性生物過程中。在經(jīng)過UV-B紫外光處理后的神農(nóng)香菊轉(zhuǎn)錄組中,共發(fā)現(xiàn)68個差異表達(dá)基因,上調(diào)表達(dá)的片段共有36個,下調(diào)表達(dá)的基因片段有32個。GO生物過程注釋主要集中在氧化還原過程、代謝過程和催化活性中。有6個基因被注釋到萜類合酶活性過程。從神農(nóng)香菊葉片... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２?ＧＯ生物過程注釋富集分析??Ｆｉｇ．２－２?Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＧＯ?ｂｉｏｌｏｇｉｃ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ??

?２基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的神農(nóng)香菊萜類物質(zhì)合酶分析???Ｃ?１９５８８．８０２６９?－１．８３?１？１６?Ｓ?葉綠體?Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ?ｒＲＮＡ修飾，氧化還原過程，代謝??ａｎｎｕｕｓ?過程，ｒＲＮＡ加工，甲基化，ＲＮＡ??加工，氧化還原酶活性，ｒＲＮＡ甲??基轉(zhuǎn)移酶活性，甲基轉(zhuǎn)移酶活性，??０－甲基轉(zhuǎn)移酶活性??Ｃ１９５８８．５１２５２?－３．００?１３９２?否?胞外基質(zhì)?Ｓｏｌａｎｕｍ?異戊二烯轉(zhuǎn)移酶活性??ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ??Ｃ１９５８８．８６２５２?－１．４５?１４３３?是?葉綠體?Ｈｅｌｉａｎｔｆｍｓ?甲基化，甲基轉(zhuǎn)移酶活性??ａｎｎｕｕｓ??基５０「??？??敘?ｍｍ??Ｉ?ｉ??１＂?Ｊ?「；??丨丨■?■?＿「……ｒ，??圖２－４?ＧＯ生物過程注釋富集分析??Ｆｉｇ．２－４?Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＧＯ?ｂｉｏｌｏｇｉｃ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ??－１７－??

ｌｅｒ？９６?（瑞士）的９６孔板中，設(shè)計ｑＲＴ－ＰＣＲ的反應(yīng)程??序?yàn)椋??９５°Ｃ?２?ｍｉｎ??９４°Ｃ?３０?ｓ?１??６０°Ｃ?１５?ｓ?＞?４０?ｃｙｃｌｅｓ??７２°Ｃ?１０ｓ??３７°Ｃ?３０ｓ??使用２－ａａＣＴ法計算基因的表達(dá)豐富度，不同部位的表達(dá)量的計算以根中表達(dá)量記為??１，茉莉酸甲酯處理下的基因表達(dá)量以未經(jīng)處理的植物葉片中的表達(dá)量為１。??３．３結(jié)果與分析??３．３．１?ＣＶＤＡＴ？基因ＯＲＦ的克隆與序列分析??神農(nóng)香菊葉片總ＲＮＡ?（圖３－１）的電泳圖片表明，５ｓ、１８ｓ和２８ｓ的三條核糖體帶??清晰，說明提取出來的ＲＮＡ具有良好的完整性，無降解現(xiàn)象，可以用于下一步的反轉(zhuǎn)??錄和基因克隆實(shí)驗(yàn)。??圖３－１神農(nóng)香菊葉片ＲＮＡ電泳圖??Ｆｉｇ．?３－１?Ｑｕａｎｔｉｔｙ?ｏｆ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｏｆ?Ｃ．?ｉｎｄｉｃｕｍ?ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ??利用設(shè)計好的特異性引物ＣｉＤＸＲ－Ｆ／ＣｉＤＸＲ－Ｒ，以神農(nóng)香菊總ＲＮＡ反轉(zhuǎn)錄獲得的??ｃＤＮＡ為模板，利用ＰＣＲ擴(kuò)增獲得目的片段（圖３－２），可以看出最明亮的條帶在??１５００ｂｐ附近，和前期轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中所預(yù)測的長度相近。將剩余ＰＣＲ產(chǎn)物進(jìn)行膠回收，??連接ｐＵＣ－Ｔ載體，轉(zhuǎn)入￡?Ｃ〇／／ＤＨ５ａ感受態(tài)細(xì)胞中，將轉(zhuǎn)化好的菌液涂在含有５０ｍｇ／Ｌ??的Ａｍｐ的ＬＢ抗性培養(yǎng)基中，在３７?°Ｃ下恒溫培養(yǎng)１２ｈ－１６ｈ。通過ＰＣＲ擴(kuò)增篩選出１０??個陽性克�。▓D３－３），選�。硞�最亮的條帶進(jìn)行測序。測序結(jié)果顯示：開放閱讀框??（ＯＲＦ）的長度為１４１９ｂｐ，編碼４７２個氨基酸的多肽鏈（圖３－４），該序列具有３個保??守

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3466431