研究背景與目的:耐輻射奇球菌（Deinococcus radiodurans,DR）是一種耐受極端電離輻射的微生物。PprI在耐輻射奇球菌中起輻射響應(yīng)總開(kāi)關(guān)作用,PprM可能是一種PprI依賴的輻射響應(yīng)的新型調(diào)控蛋白。本實(shí)驗(yàn)旨在構(gòu)建穩(wěn)定遺傳表達(dá)抗輻射基因pprM/pprI的果蠅模型。研究抗輻射基因pprM/pprI轉(zhuǎn)入果蠅后輻射抗性的影響,為輻射損傷治療提供新思路。為監(jiān)測(cè)核事故泄漏生物計(jì)量以及進(jìn)一步研究耐輻射奇球菌的輻射防御機(jī)制及人類的輻射醫(yī)學(xué)防護(hù)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法:1、用pGEX-6p-1-pprM、pDsRed1-N1-flag-pprI為PCR底物模板,擴(kuò)增pprM、pprI基因,構(gòu)建pattb-UAST-HA-pprM和pattb-UAST-HA-pprI載體。2、果蠅顯微注射技術(shù)將pattb-UAST-HA-pprM和pattb-UAST-HA-pprI載體注射入果蠅胚胎中,構(gòu)建轉(zhuǎn)基因果蠅模型。3、提取輻照前后果蠅的總蛋白,并分別檢測(cè)轉(zhuǎn)基因果蠅和對(duì)照果蠅的總超氧化物歧化酶（SOD）活力、還原型谷胱甘肽（GSH）含量、過(guò)氧化氫酶（CAT）活力以及丙二醛（MDA）含量。... 

【文章來(lái)源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

8.4轉(zhuǎn)基因果蠅的平衡與定位Figure2.2.8.4balanceandpositioningoftransgenicfruitflies

圖 2.3.1 PCR 擴(kuò)增目的基因 pprM 電泳圖 pprM electrophoresis of the target gene amplified by PM：DNAmarker；1：pGEX-6p-1-pprM PCR 產(chǎn)物ST-pprM 載體的鑒定的抗性 LB 平板上隨機(jī)挑取單菌落，進(jìn)行菌落抽提，用 EcoRI 和 XbaI 對(duì)提取的質(zhì)粒載體進(jìn)ttb-UAST-pprM 酶切產(chǎn)物的大小與目的基因 p對(duì)應(yīng)，2.3.2 右圖 1 泳道菌落 PCR 目的基因 pNAmarker 位置接近。圖 2.3.3 部分 pattb-UAST 比對(duì)結(jié)果說(shuō)明目的基因 pprM 成功插入到 pa證明 pattb-UAST-pprM 載體構(gòu)建成功。

圖 2.3.1 PCR 擴(kuò)增目的基因 pprM 電泳圖.1 The pprM electrophoresis of the target gene amplified by PCRM：DNAmarker；1：pGEX-6p-1-pprM PCR 產(chǎn)物b-UAST-pprM 載體的鑒定克隆的抗性 LB 平板上隨機(jī)挑取單菌落，進(jìn)行菌落 PCR，利質(zhì)粒抽提，用 EcoRI 和 XbaI 對(duì)提取的質(zhì)粒載體進(jìn)行酶切知，pattb-UAST-pprM 酶切產(chǎn)物的大小與目的基因 pprM 和大小相對(duì)應(yīng)，2.3.2 右圖 1 泳道菌落 PCR 目的基因 pprM 的00bpDNAmarker 位置接近。圖 2.3.3 部分 pattb-UAST-pprM BLAST 比對(duì)結(jié)果說(shuō)明目的基因 pprM 成功插入到 pattb-UAS變，證明 pattb-UAST-pprM 載體構(gòu)建成功。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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