發(fā)布時間：2021-07-25 13:08

　　根據(jù)草菇（Volvariella volvacea）的錳超氧化物歧化酶（Mn-SOD）基因序列,構建重組質粒pBAR GPE1/Mn-SOD,轉化大腸桿菌（Escherichia coli）Stbl3菌株,采用單因素實驗對誘導劑IPTG濃度(0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1)、誘導培養(yǎng)時間（0、2、4、6、8、10 h）及MnCl₂濃度(0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1)進行優(yōu)化,以獲得最優(yōu)表達條件。在最優(yōu)條件下分別進行耐熱性、耐冷性及耐鹽性分析,測定重組菌pBAR GPE1/Mn-SOD和對照菌pBAR GPE1的SOD酶活力及生長情況。結果表明:最優(yōu)表達條件為IPTG濃度1 mmol·L^-1,誘導培養(yǎng)時間6 h,不需要添加MnCl₂;在最優(yōu)條件下,與對照菌相比,發(fā)現(xiàn)重組菌的SOD酶活力顯著提高,生長情況較好,提高了轉化菌株的耐熱性、耐冷性和耐鹽性。 

【文章來源】：食用菌學報. 2020,27(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

PCR 擴增重組菌Mn-SOD基因的

從圖2可以看到,在相對分子質量15000～25000之間出現(xiàn)一條明顯的蛋白質條帶,與草菇Mn-SOD蛋白質的理論相對分子質量19530吻合。2.3 重組菌表達Mn-SOD蛋白質的最優(yōu)表達條件

在加入誘導劑后重組蛋白質Mn-SOD開始積累,隨著培養(yǎng)時間增加,Mn-SOD表達量逐漸增加,在6 h時(泳道4)達到最高;之后隨著培養(yǎng)時間的繼續(xù)增加,Mn-SOD的表達量開始下降;當誘導時間為0～6 h時,平均灰度值逐漸增加,分別是41.969、42.909、45.172、68.347,因此最佳誘導培養(yǎng)時間為6 h(圖4)。2.3.3 MnCl2濃度

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]草菇子實體提取物的抗氧化活性[J]. 楊健華,秦惠娟,彭璐,王琦,李玉.  食用菌學報. 2017(02)
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[5]西伯利亞蓼PsMnSOD基因的耐鹽堿性鑒定及其在鹽堿脅迫下的表達模式[J]. 付暢,張恒,劉關君,楊傳平.  分子植物育種. 2009(05)
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碩士論文
[1]高溫脅迫下香菇疏水蛋白和熱激蛋白的轉錄表達量變化及功能研究[D]. 辛苗苗.南京農業(yè)大學 2016
[2]鹽生杜氏藻錳超氧化物歧化酶（MnSOD）的基因克隆、表達與功能研究[D]. 鄧婷婷.四川大學 2007



本文編號：3302088