本文關(guān)鍵詞：花絨寄甲熱休克蛋白基因表達(dá)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：花絨寄甲(Dastarcus helophoroides Sharp)是天牛類林木蛀干害蟲的有效天敵昆蟲,在自然界中其生命活動(dòng)無時(shí)無刻要承受很多不利于生長生存的影響因子的威脅,如極端的高低溫、氧化、饑餓等環(huán)境脅迫�；ńq寄甲經(jīng)長期的自然適應(yīng)中,具備很強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力。熱休克蛋白(Heat Shock Protein)作為生物體內(nèi)的應(yīng)激蛋白,在調(diào)節(jié)和適應(yīng)環(huán)境中的不良刺激以維持機(jī)體正常的生長發(fā)育的過程中具有重要作用。為闡明熱休克蛋白HSP70(Heat Shock Protein 70)與sHSP(small Heat Shock Protein)在花絨寄甲發(fā)育歷期及雌雄成蟲抵抗環(huán)境脅迫中的作用,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析其在發(fā)育階段和不同環(huán)境脅迫時(shí)表達(dá)情況。本研究的主要結(jié)果如下:從花絨寄甲成蟲轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫得到3條HSP70基因和3條小分子熱休克蛋白,即D.hHSP69.09、D.hHSP70.11、D.hHSP71.88及D.hsHSP11.06、D.hsHSP11.10和D.hsHSP20.99,其ORF大小分別為1980、1967、1910bp、444、574和789bp;編碼氨基酸個(gè)數(shù)為626、636、655、102、102和185;理論等電點(diǎn)為5.57、6.01、5.93、9.52、8.01和6.31;分子量大小為69.09kDa、70.11kDa、71.88kDa、11.06kDa、11.10kDa和20.99kDa。在花絨寄甲不同發(fā)育階段,最高表達(dá)量為:D.hHSP69.09在1齡幼蟲期,D.hHSP70.11和D.hHS71.88在雄蟲;D.hsHSP11.06和D.hsHSP11.10的最高的表達(dá)水平出現(xiàn)在2齡幼蟲階段,D.hsHSP20.09在5齡幼蟲階段。不同組織中的最高表達(dá)量為:D.hHSP69.09和D.hHSP70.11在卵巢,D.hHSP71.88和D.hsHSP11.06在脂肪體,D.hsHSP11.10和D.hsHSP20.99基因在精巢中表達(dá)量最高。D.hHSP69.09在雌蟲中表達(dá)量顯著高于雄蟲;D.hHSP70.11和D.hHSP71.88在雄蟲中表達(dá)量顯著高于雌蟲。HSP基因表達(dá)量最高時(shí)對(duì)應(yīng)的溫度為35℃或38℃。HSP基因在41℃高溫刺激下,均出現(xiàn)時(shí)間效應(yīng)。氧化劑處理后D.hHSP69.09、D.hsHSP11.10和D.hs HSP20.99在雌蟲中的表達(dá)量顯著高于雄蟲,D.hHSP70.11和D.hHSP71.88為雄蟲顯著高于雌蟲,且HSP基因表達(dá)量最高時(shí)所對(duì)應(yīng)的濃度在20m M和30mM之間�；ńq寄甲雌蟲耐饑餓能力高于雄蟲。隨饑餓時(shí)間延長,雄蟲中HSP70基因表達(dá)量降低。雌成蟲中D.hHSP69.09在饑餓第2天時(shí)表達(dá)量略微上升;D.hHSP70.11在饑餓處理前4天表達(dá)量降低,后略微上升,第8天時(shí)表達(dá)量達(dá)到最高。D.hHSP71.88基因的表達(dá)量饑餓處理后上升,第8天表達(dá)量驟升。雄蟲中D.hsHSP11.06最大表達(dá)水平在第2天,雌蟲在第6~12天;D.hsHsp11.10雄蟲最大表達(dá)水平在第6~10天,雌蟲在第4天;D.hsHsp 20.99雄蟲最大表達(dá)水平在第6天,雌蟲在第4天。綜上所述,花容寄甲HSP70和sHSP基因均能響應(yīng)各種環(huán)境脅迫,在其生長發(fā)育、繁殖與耐高溫、抗氧化、耐饑餓等過程中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：花絨寄甲 HSP70 sHSP 環(huán)境脅迫 RT-qPCR
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S763.306.4
【目錄】：

• 摘要6-8
• abstract8-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-19
• 1.1 花絨寄甲研究進(jìn)展12-14
• 1.1.1 花絨寄甲的生物學(xué)研究12-13
• 1.1.2 花絨寄甲的人工繁育方面研究13
• 1.1.3 花絨寄甲生物防治作用方面研究13
• 1.1.4 花絨寄甲的抗性研究13-14
• 1.2 熱休克蛋白的研究進(jìn)展14-17
• 1.2.1 熱休克蛋白的發(fā)現(xiàn)與分類14-15
• 1.2.2 熱休克蛋白的結(jié)構(gòu)特征15
• 1.2.3 熱休克蛋白的生物學(xué)功能15-17
• 1.3 本試驗(yàn)的目的意義以及創(chuàng)新點(diǎn)17-18
• 1.3.1 本試驗(yàn)的目的意義17-18
• 1.3.2 本試驗(yàn)的創(chuàng)新點(diǎn)18
• 1.4 研究內(nèi)容及技術(shù)路線18-19
• 1.4.1 研究內(nèi)容18
• 1.4.2 技術(shù)路線18-19
• 第二章 材料與方法19-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 2.1.1 試蟲19
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器19
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品19-20
• 2.2 花絨寄甲HSP基因的序列檢索20
• 2.3 HSP基因序列分析及進(jìn)化樹構(gòu)建20
• 2.4 花絨寄甲總RNA的提取、純化和鑒定20-21
• 2.4.1 利用TRIZOL Kit提取總RNA20
• 2.4.2 花絨寄甲總RNA的檢測20-21
• 2.4.3 cDNA第一鏈的合成和純化21
• 2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析基因的表達(dá)21-23
• 2.5.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)內(nèi)參引物、反應(yīng)體系及反應(yīng)條件的確定21-22
• 2.5.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析22
• 2.5.3 數(shù)據(jù)處理22-23
• 第三章 結(jié)果與分析23-41
• 3.1 花絨寄甲HSP70基因的分子特性與表達(dá)分析23-32
• 3.1.1 花絨寄甲HSP70基因cDNA的檢索及序列分析23-25
• 3.1.2 定量PCR25-32
• 3.2 花絨寄甲sHSP基因的分子特性與表達(dá)分析32-41
• 3.2.1 花絨寄甲sHSP基因cDNA的檢索及序列分析32-34
• 3.2.2 定量PCR34-41
• 第四章 討論41-44
• 4.1 花絨寄甲HSP基因的結(jié)構(gòu)41
• 4.1.1 花絨寄甲HSP70基因的結(jié)構(gòu)41
• 4.1.2 花絨寄甲sHSP基因的結(jié)構(gòu)41
• 4.2 花絨寄甲HSP基因的時(shí)間和空間特異性41-42
• 4.2.1 花絨寄甲HSP70基因的時(shí)間和空間特異性41-42
• 4.2.2 花絨寄甲sHSP基因的時(shí)間和空間特異性42
• 4.3 花絨寄甲HSP基因在不同非生物應(yīng)激中的表達(dá)特性42-44
• 4.3.1 花絨寄甲HSP70基因在不同非生物應(yīng)激中的表達(dá)特性42-43
• 4.3.2 花絨寄甲sHSP基因在不同非生物應(yīng)激中的表達(dá)特性43-44
• 第五章 結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)和研究展望44-46
• 5.1 主要結(jié)論44
• 5.1.1 獲得3條HSP70和3條sHSP cDNA序列44
• 5.1.2 明確3條HSP70和3條sHSP基因的時(shí)間和空間分布特性44
• 5.1.3 明確3條HSP70和3條sHSP基因在不同非生物應(yīng)激中的表達(dá)特性44
• 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)44
• 5.3 研究展望44-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 致謝51-52
• 作者簡介52

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：328091