癌癥主要是由基因突變引發(fā)的疾病,其發(fā)生率及死亡率居高不下,嚴重影響我國乃至全球人類健康。目前,除了常規(guī)放化療外,針對各類突變癌基因的靶向治療備受青睞。然而在臨床實踐中,靶向治療仍然面臨諸多問題,比如,一方面腫瘤細胞能夠逃逸靶基因信號通路,獲取新的生存方式,從而導致靶向藥物失效;另一方面,很多已知的致癌基因無法成藥。因此,篩選和鑒定可成藥的靶基因成為解決問題的關鍵。協(xié)同致死效應是指當某兩個特定的基因同時突變失活時,會導致細胞死亡的生物學效應;而這兩個基因單獨任何一個突變失活都不會導致細胞死亡。利用這一效應,PARP抑制劑治療BRCA突變腫瘤的方法應運而生。此后,基于協(xié)同致死效應的功能篩選業(yè)已成為腫瘤領域藥物研發(fā)的重要方向。本研究課題基于協(xié)同致死效應在胃腸道腫瘤中篩選靶向突變ERBB3及突變p53基因的新型效應分子,并通過功能研究探究協(xié)同致死分子機制。課題1,通過分析癌癥基因組圖譜（the cancer genome atlas,TCGA）數(shù)據(jù)庫,我們發(fā)現(xiàn)ERBB3基因在人類胃腸道癌癥中高頻突變,利用攜帶突變型ERBB3基因（Mut-ERBB3）和野生型ERBB3基因（WT-ERBB3）的... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

ERBB3蛋白的熱點突變圖譜

浙江大學博士學位論文正文課題1研究內容與結果7Lapatinib（一種HER2的小分子抑制劑），Apatinib（一種VEGFR2的小分子抑制劑），Linsitinib（一種IGF-1R的小分子抑制劑），Tivantinib（一種c-MET的小分子抑制劑）以及BGJ398（一種FGFR1-3的抑制劑）處理72小時后的細胞致死效果。細胞活力的熱圖結果顯示（如圖1-3），這5株細胞系對Gefitinib，Lapatinib，Apatinib，Linsitinib和Tivantinib耐藥響應沒有顯著性的差異。但值得注意的是，攜帶ERBB3-E928G突變的CW-2細胞系對FGFR1-3抑制劑BGJ398顯著耐受。圖1-3初步藥物篩選發(fā)現(xiàn)CW-2細胞系對BGJ398顯著耐受圖1-3將5種細胞系分別鋪板于96孔板中，每孔5000個細胞。待細胞貼壁后，配制如圖不同濃度的RTKs抑制劑（包括Gefitinib，Lapatinib，Apatinib，Linsitinib，Tivantinib和BGJ398）分別處理鋪板于96孔板中的5種細胞系，處理3天后利用Celltiter-Glo方法檢測細胞活力，并分析結果。為了進一步證實此實驗結果，我們挑選CW-2細胞系與WT-ERBB3細胞系AGS同時給予2.5μM的BGJ398處理，分別在藥物處理3天，5天，7天后檢測細胞活力。結果顯示，WT-ERBB3細胞系AGS的細胞活力在FGFR1-3抑制劑BGJ398處理的7天內顯著下降，而Mut-ERBB3細胞系CW-2的細胞活力幾乎不受影響（如圖1-4）。

浙江大學博士學位論文正文課題1研究內容與結果8圖1-4CW-2細胞系比AGS細胞系對BGJ398處理呈現(xiàn)不同時間點的耐受圖1-4利用培養(yǎng)基配制終濃度為2.5μM的BGJ398，分別處理貼壁于96孔板中的CW-2和AGS細胞系，在處理3天，5天和7后利用Celltiter-Glo方法檢測細胞活力結果，并分析結果。BGJ398作為一種選擇性FGFR抑制劑，可以靶向作用于FGFR1/2/3，在無細胞試驗中對FGFR1/2/3的IC50分別為0.9nM/1.4nM/1nM[32,33]。然而，F(xiàn)GFR家族成員還包含F(xiàn)GFR4[34]，且目前還沒有BGJ398對FGFR4有抑制效果的相關研究報道。FGFR4作為成纖維細胞生長因子受體FGFR家族成員，其在胃腸道癌癥的發(fā)生發(fā)展中也扮演重要角色，F(xiàn)GFR4的過表達和突變都被發(fā)現(xiàn)能夠促進胃腸道癌癥細胞的生長[35-37]。因此，為了進一步探索ERBB3-E928G突變細胞對FGFR4抑制劑的腫瘤殺傷響應，我們挑選出兩種FGFR4的選擇性抑制劑BLU554和BLU9931，利用不同濃度的BLU554和BLU9931分別處理CW-2和AGS細胞系，結果顯示CW-2和AGS細胞系對這兩種FGFR4抑制劑的響應并沒有顯著性差異（如圖1-5）。提示ERBB3的E928G突變可能不影響細胞對FGFR4抑制劑的腫瘤殺傷響應。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]DNA methylation detection methods used in colorectal cancer[J]. Yu-Xia Zhan,Guang-Hua Luo.  World Journal of Clinical Cases. 2019(19)
[2]突變型p53與其合成致死基因的研究進展[J]. 劉同陽,郭海強,朱美妍,黃英澤,賈舒婷,羅瑛,張繼虹.  遺傳. 2015(04)



本文編號：3216959