脂肪含量是評價魚類品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。適宜的肌內(nèi)脂含量可以提高肌肉嫩度和多汁性,有利于改善肉質(zhì)和口感,而腹腔脂肪的大量沉積不僅會造成魚體代謝紊亂、免疫力和應(yīng)激耐受力下降,而且會導(dǎo)致魚類生長性能下降,飼料利用率降低,從而降低養(yǎng)殖效率。因此,了解脂肪沉積分子機制可為魚類肉質(zhì)改良改善、生產(chǎn)效率提高提供理論依據(jù),具有較大的實際意義。脂肪沉積是一個復(fù)雜的生理和生化過程,由代謝酶調(diào)節(jié),受到脂肪攝取、合成和分解等信號通路中相關(guān)基因的調(diào)控。正確了解脂肪代謝中的關(guān)鍵基因及信號通路在脂肪沉積過程中的作用機制是我們進行脂肪沉積調(diào)控,進而改善肉類品質(zhì)的基礎(chǔ)。激素敏感脂肪酶（hormone-sensitive lipase,HSL or LIPE）是脂肪動員的關(guān)鍵酶和限速酶,它能夠?qū)⒏视腿シ纸獬捎坞x脂肪酸,對細胞內(nèi)調(diào)節(jié)甘油三酯含量起重要作用,是影響動物脂肪沉積的關(guān)鍵酶之一。本研究以鯉為研究對象,從HSL基因入手,探究其時空表達特征及其與脂肪沉積的關(guān)系,探討其對鯉脂肪沉積的影響,進一步采用基因敲除技術(shù)研究HSL基因?qū)χ敬x的影響,探討其可能的生物學(xué)功能及在脂肪代謝調(diào)控通路中的作用機制,旨在為深入研究鯉脂肪沉積... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 魚類脂肪性狀相關(guān)功能基因研究進展
        1.1.1 激素敏感性脂肪酶基因
        1.1.2 脂肪酸合成酶基因
        1.1.3 乙酰輔酶A羧化酶基因
        1.1.4 脂蛋白脂酶基因
        1.1.5 脂肪甘油三酯脂肪酶基因
    1.2 CRISPR-Cas9 系統(tǒng)及其應(yīng)用
        1.2.1 CRISPR-Cas9 的結(jié)構(gòu)及作用機制
        1.2.2 CRISPR-Cas9 的分類
        1.2.3 CRISPR-Cas9 的應(yīng)用
    1.3 研究目的及意義
第二章 鯉HSL基因時空表達特征及與脂肪沉積相關(guān)性研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 主要儀器與試劑
        2.1.2 樣品采集
        2.1.3 總RNA提取
        2.1.4 cDNA第一鏈的合成
        2.1.5 反轉(zhuǎn)錄與HSL基因核心片段的構(gòu)建
        2.1.6 HSL基因全長c DNA序列的獲得
        2.1.7 生物信息學(xué)和統(tǒng)計分析
        2.1.8 基因表達規(guī)律分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 鯉HSL基因全長c DNA序列及分析
        2.2.2 氨基酸序列多重比對
        2.2.3 系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.2.4 HSL基因的組織分布
        2.2.5 HSL基因在早期發(fā)育階段的表達情況
        2.2.6 HSL基因表達與脂肪沉積的相關(guān)性研究
    2.3 討論
    2.4 本章小結(jié)
第三章 HSL基因敲除對脂肪沉積的影響及機制初探
    3.1 材料與方法
        3.1.1 主要儀器與試劑
        3.1.2 實驗魚
        3.1.3 基因敲除靶位點設(shè)計
        3.1.4 gRNA制備
        3.1.5 受精卵顯微注射
        3.1.6 突變效率檢測
        3.1.7 HSL2基因突變純系的構(gòu)建
        3.1.8 HSL2基因突變個體表型鑒定
        3.1.9 脂肪代謝相關(guān)基因表達水平檢測
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 基因敲除靶位點選擇及gRNA制備
        3.2.2 基因敲除效率
        3.2.3 HSL2基因突變體的獲得
        3.2.4 突變位點序列及編碼氨基酸分析
        3.2.5 HSL2基因突變對斑馬魚表型的影響
        3.2.6 HSL2基因突變對脂代謝相關(guān)基因的影響
    3.3 討論
    3.4 本章小結(jié)
總結(jié)
參考文獻
碩士期間研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]持續(xù)熱應(yīng)激對生長豬生長性能和脂質(zhì)代謝相關(guān)激素、酶及產(chǎn)物的影響[J]. 張闖,辛海瑞,郝月,顧憲紅.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2019(06)
[2]紫蘇籽提取物對育肥牛肌內(nèi)脂肪沉積的影響[J]. 張海波.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2019(04)
[3]饑餓脅迫對大黃魚激素敏感性脂肪酶和乙酰輔酶A羧化酶mRNA表達及酶活性的影響[J]. 錢寶英,黃紅麗,李娟,曹明月,張玉,趙亞運,薛良義.  海洋學(xué)報. 2018(12)
[4]斑馬魚——理想的現(xiàn)代藥學(xué)研究模式生物[J]. 毛雯.  南昌師范學(xué)院學(xué)報. 2018(06)
[5]外源性脂肪酸對羅非魚脂肪細胞增殖與分化的影響[J]. 王雅文,喬芳,張美玲,賈永義,杜震宇.  水生生物學(xué)報. 2018(03)
[6]草魚乙酰輔酶A羧化酶β基因全長cDNA分子克隆與表達分析[J]. 嚴媛,程漢良,許建和,韓振,易樂飛,申欣,丁祝進.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2018(05)
[7]梭魚脂肪酸合成酶基因部分片段的克隆和表達分析[J]. 楊文平,王愛民,於葉兵,劉飛,呂林蘭,呂富.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(23)
[8]鯉脂肪酸合成酶基因的克隆與表達分析[J]. 孫志鵬,呂偉華,匡友誼,曹頂臣,佟廣香,孫效文,鄭先虎.  水產(chǎn)學(xué)雜志. 2017(04)
[9]細菌CRISPR-Cas系統(tǒng)的研究進展[J]. 胡麗,陳實.  微生物學(xué)報. 2017(11)
[10]斑馬魚營養(yǎng)性脂肪肝模型構(gòu)建[J]. 李鈺,何夙旭,張震,徐俐,丁倩雯,郭小澤,易敢峰,徐樹德,馬徐發(fā),周志剛.  水產(chǎn)學(xué)報. 2017(05)

博士論文
[1]鯉魚肌肉脂肪性狀相關(guān)基因篩選及功能研究[D]. 呂偉華.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017

碩士論文
[1]大黃魚部分脂肪代謝相關(guān)基因的克隆及其表達分析[D]. 周旋.集美大學(xué) 2009



本文編號：3159151