黃花苜蓿（Medicago falcata L.）,豆科苜蓿屬草本植物,是一種分布范圍極廣、抗逆能力很強、形態(tài)多樣、品質(zhì)優(yōu)良、營養(yǎng)價值豐富的豆科牧草。為了研究黃花苜蓿中既能響應(yīng)生物脅迫,又能響應(yīng)抗非生物脅迫的基因,本研究將黃花苜蓿的MfERF049基因轉(zhuǎn)化至截形苜蓿A17（Medicago truncatula A17）的根中對該基因在提高植物抗逆性方面的功能進行了分析。實驗室前期對野生黃花苜蓿進行鹽和低溫脅迫處理,并在其轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果中篩選出表達具有顯著差異的基因。在此基礎(chǔ)之上,本研究經(jīng)過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),其中的c70245-g2序列與截形苜蓿A17中的MtDREB2A為同源基因。具體研究方法是:首先以NCBI網(wǎng)站上報道的MtDREB2A基因序列為模板設(shè)計特異引物,分析目的基因MfERF049在經(jīng)過不同條件脅迫的野生型黃花苜蓿中的表達模式。之后利用同源基因克隆法得到了黃花苜蓿的MfERF049基因,并將其構(gòu)建到表達載體pKGWRR中,利用毛根轉(zhuǎn)化法將其轉(zhuǎn)化至截形苜蓿A17的根部,對轉(zhuǎn)基因根的表型（根長、根鮮重）統(tǒng)計結(jié)果、生理指標（POS、SOS、MDA、PRO）檢測結(jié)果、目的基因和... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

黃花苜蓿的生長遍布全球Figure1.1MedicagofalcataL.iswidelydistributedintheworld

圖 1.2 擬南芥中的 AtDREB2A 基因可以受到 NaCl 脅迫的誘導(dǎo)AT 形線:負調(diào)控;箭頭:正調(diào)控[23]Figure 1.2 A model for the regulatory network involving TaCHP in Arabidopsisindicates that AtDREB2A gene can respond to NaCl stressT-shaped line: repression; arrow: promotion據(jù)文獻報道，基因 OsDREB2A 超表達的轉(zhuǎn)基因水稻植株在高鹽和干旱脅迫下比非的根的存活率要高[24]。也有研究表明，擬南芥（Arabidopsis）中的 DREB1A 和 D因子主要參與擬南芥中與冷和干旱相關(guān)的基因的表達，是專門與干旱順式應(yīng)E/ CBF3)相互作用的[25,26]（如圖 1.2 所示）。另外，如圖 1.3 所示，與野生型相比物同時表達應(yīng)激反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子 AtDREB2 A、 AtHB7 和 AtABF3 時對干旱、鹽和耐受性增強[27]，且 DREB2A 的過表達還能誘導(dǎo)熱休克( HS)相關(guān)基因[28]。也有研究芥脫水響應(yīng)元件結(jié)合蛋白 DREB2A 的轉(zhuǎn)錄因子可以誘導(dǎo)植物應(yīng)答干旱和熱應(yīng)激脅

AP2/EREBP 家族 MfERF049 基因?qū)μ岣叨箍浦参锷锩{迫和非生物脅迫抗性的功能分析B2A 的上調(diào)，且轉(zhuǎn)基因玉米幼苗受到冷、干旱、鹽和熱脅迫時 ZmDR高[32,33]（如圖 1.4）。另外，在干旱、高溫、高滲透或鹽堿脅迫條件 的植株比對照植株的種子萌發(fā)率高，且在脅迫條件下存活的百分比更、高溫和低溫脅迫，會誘導(dǎo)基因 GmDREB2A 的表達量升高，從而增強力[35]。

【參考文獻】：
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