芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）是我國的傳統(tǒng)名花,因性喜冷涼干燥,多分布或栽培在我國華北、東北、西北和西南地區(qū)。近年來,隨著芍藥在園林花境景觀中的廣泛應用和芍藥高檔切花市場的興起,浙江杭州、江蘇揚州和上海等“長三角”地區(qū)紛紛從山東菏澤、河南洛陽等北方主產(chǎn)區(qū)開展“芍藥南移”工作。然而,由于我國江南地區(qū)夏季高溫持續(xù)時間長,使得大多數(shù)優(yōu)良芍藥品種“南移”后出現(xiàn)生長不良、難以展現(xiàn)原產(chǎn)地的優(yōu)良觀賞性狀。夏季高溫已然成為限制芍藥切花在南方規(guī)�；a(chǎn)及其在園林景觀中廣泛應用的主要因素之一,而找到調(diào)控芍藥耐高溫能力的關(guān)鍵基因?qū)τ谂嘤透邷啬芰姷纳炙幤贩N至關(guān)重要。為此,本研究克隆了芍藥HSP70基因并對其序列進行生物信息學分析,通過表達模式、原核表達、亞細胞定位等研究明確芍藥HSP70基因的表達特性,構(gòu)建芍藥HSP70基因的超表達載體并遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥、觀察高溫脅迫對轉(zhuǎn)基因植株的影響,從而深入了解芍藥HSP70基因在調(diào)控芍藥耐高溫能力方面的功能。主要結(jié)果如下:（1）通過RACE技術(shù)克隆了芍藥HSP70基因的cDNA全長序列,該基因長2195 bp,具有5’非編碼區(qū)（70 bp）、... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１通過ＲＡＣＥ方法獲得的芍藥／ｉＳ／ＶＯ基因ｃＤＮＡ片段??

Ｍ：?ＤＬ５０００；?１：?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｐ／／／５Ｐ７０??在此基礎之上，以芍藥‘紫鳳羽’葉片中所提取的ＤＮＡ為模板，通過ＰＣＲ方法進行??Ｐ／／／５Ｐ７０ＤＮＡ序列的擴増，獲得一條約為３０００?ｂｐ的條帶（圖２－３），經(jīng)過擴增條帶回收、??連接、轉(zhuǎn)化、搖菌、質(zhì)粒提取、測序等一系列過程后，最終拼接獲得３６３６?ｂｐ的序列。通??過序列比對，該ＤＮＡ序列具有２個外顯子和１個內(nèi)含子，該內(nèi)含子開始于序列ＧＴ并以ＡＧ??結(jié)束，符合Ｂｒｅａｔｈｎａｃｈ和Ｃｈａｍｂｏｎ提出的“ＧＴ－ＡＧ”剪切規(guī)律［１１８］，登錄號為ＭＦ８１７４９８?（圖??２－４、２－５）。??２１４?１７３９??ＭＦ８１７４９８?５?ｒＴ??＾??－３??｜??｜?｜?｜?｜?｜?｜?｜???Ｏｂｐ?５００ｂｐ?１０００ｂｐ?１５００ｂｐ?２０００ｂｐ?２５００ｂｐ?３０００ｂｐ?３５００ｂｐ??圖２－４?／Ｖ／／ＳＰ７０基因的ＤＮＡ結(jié)構(gòu)??外顯子為灰色盒子，內(nèi)含子為細線，非翻譯區(qū)為黑線??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｐ１ＨＳＰ７０??Ｅｘｏｎｓ?ａｒｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｇｒｅｙ?ｂｏｘｅｓ，?ｉｎｔｒｏｎｓ?ａｓ?ｌｉｎｅｓ?ａｎｄ?ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ?ｒｅｇｉｏｎ?ｂｌａｃｋ?ａｓ?ｌｉｎｅｓ??

?１?ｄ?２ｄ?３ｄ??Ｄａｙ?ａｆｔｅｒ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??圖２－７高溫脅迫下芍藥葉片的相對含水量??Ｆｉｇｕｒｅ?２－７?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｗａｔｅｒ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｉｎ?Ｐ．?ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ?ｌｅａｖｅｓ?ｕｎｄｅｒ?ｈｉｇｈ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｓｔｒｅｓｓ??采用ＤＡＢ染色法觀測了高溫脅迫下芍藥葉片中１七（）２積累水平，ＤＡＢ染色越深，表??明Ｈ２０２含量越高。從圖２－８可以看出，隨著高溫脅迫時間的推移，芍藥葉片的顏色不斷??加深，Ｈ２０２含量顯著增加。??Ｏｄ?１ｄ?２ｄ?３ｄ??Ｄａｙ?ａｆｔｅｒ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??圖２－８高溫脅迫下芍藥葉片中Ｈ２０２積累水平??Ｆｉｇｕｒｅ?２－８?Ｈ２Ｏ２?ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ?ｉｎ?Ｐ．?ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ?ｌｅａｖｅｓ?ｕｎｄｅｒ?ｈｉｇｈ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｓｔｒｅｓｓ??１１１??Ｏｄ?１?ｄ?２ｄ?３ｄ??Ｄａｙ?ａｆｔｅｒ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??圖２－９高溫脅迫下芍藥葉片中ｏ２＿積累水平??Ｆｉｇｕｒｅ?２－９?Ｏ２＇?ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ?ｉｎ?Ｐ．?ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ?ｌｅａｖｅｓ?ｕｎｄｅｒ?ｈｉｇｈ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｓｔｒｅｓｓ??采用熒光探針法觀測了高溫脅迫下芍藥葉片中〇２＿積累水平，熒光強度越強，表明??〇２－積累越多。從圖２－９可以看出

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]蠟梅熱激蛋白70（HSP70）基因的克隆及功能分析[D]. NGUYEN VAN TIEN（阮文進）.西南大學 2015

碩士論文
[1]龍須菜熱激蛋白基因克隆及在高溫脅迫下的表達模式分析[D]. 丁艷.中國海洋大學 2014
[2]石斛蘭花期和花色的轉(zhuǎn)基因研究[D]. 聶小容.四川農(nóng)業(yè)大學 2005



本文編號：3102036