柑橘潰瘍病是由地毯草黃單胞桿菌柑橘致病變種（Xanthomonas axonopodis pv.citri,Xac）引起的一種細菌性病害,可影響大部分的商業(yè)柑橘栽培品種,造成嚴重的經濟損失。選育優(yōu)質抗病品種是解決該病害問題的根本途徑,其中,利用基因工程將抗病基因導入栽培品種是解決柑橘病害的一條快速而有效的途徑。WRKY轉錄因子和病程相關蛋白（pathogenesis-related proteins,PRs）在植物抗病信號調控途徑中起著重要作用。本研究根據柑橘潰瘍病高感品種紐荷爾臍橙（Citrus sinensis（L.）Osbeck）和高抗品種四季橘（Citrus madurensis）受潰瘍病侵染后的轉錄組數據,篩選了在這兩個品種中表達差異顯著的24個WRKY和4個PR基因進行研究,在此基礎上,詳細研究了4個WRKY基因和2個PR1基因在柑橘潰瘍病抗性中的功能和作用。具體研究結果如下:1.候選基因的克隆和生物信息學分析克隆了Cs WRKY22、Cs WRKY50、Cs WRKY72-1、Cs WRKY72-2、和Cs PR1-1、Cs PR1-2的編碼序列,ORF分別為921bp、... 

【文章來源】：西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第1章 文獻綜述
    1.1 柑橘潰瘍病
        1.1.1 柑橘潰瘍病病原菌分類
        1.1.2 柑橘潰瘍病的危害
        1.1.3 柑橘潰瘍病的防治
    1.2 植物的防御機制
        1.2.1 MAPK級聯信號途徑
        1.2.2 激素類信號途徑
    1.3 WRKY轉錄因子
        1.3.1 WRKY結構域和W盒
        1.3.2 WRKY轉錄因子的分類
        1.3.3 WRKY轉錄因子的生物學功能
        1.3.4 植物激素對WRKY的調節(jié)作用
    1.4 植物病程相關蛋白
        1.4.1 植物病程相關蛋白的分類
        1.4.2 植物病程相關蛋白PR-1 家族
        1.4.3 PR-1 蛋白的結構模型及分類
        1.4.4 PR-1 蛋白的功能
        1.4.5 植物激素對PR-1 的調節(jié)作用
    1.5 柑橘潰瘍病的抗性育種
第2章 引言
    2.1 研究目的與意義
    2.2 研究內容
    2.3 技術路線
第3章 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 主要儀器設備
        3.1.3 實驗試劑
        3.1.4 常用溶液的配制
        3.1.5 培養(yǎng)基
    3.2 方法
        3.2.1 目的基因的篩選
        3.2.2 目的基因的克隆
        3.2.3 WRKY基因亞細胞定位分析
        3.2.4 WRKY基因的表達分析
        3.2.5 轉基因錦橙的獲得
        3.2.6 轉基因植株的抗性評價
第4章 結果與分析
    4.1 目的基因篩選
    4.2 目的基因的克隆及序列分析
    4.3 目的基因的序列分析
        4.3.1 CsWRKY蛋白的多序列比對和進化樹分析
        4.3.2 CsPR-1 的序列分析和進化樹分析
    4.4 CsWRKY的亞細胞定位
        4.4.1 CsWRKY的亞細胞定位預測
        4.4.2 CsWRKY轉化洋蔥表皮細胞分析
    4.5 CsWRKY的誘導分析
        4.5.1 潰瘍病對CsWRKY的誘導表達分析
        4.5.2 外源激素誘導CsWRKY的表達分析
    4.6 超量表達轉基因錦橙植株的獲得
        4.6.1 目的基因轉化錦橙
        4.6.2 轉基因錦橙的PCR檢測
    4.7 轉基因錦橙的抗病性分析
        4.7.1 轉基因植株的平均病斑面積比較
        4.7.2 轉基因植株病情指數的比較
    4.8 轉基因錦橙中相關基因表達水平分析
    4.9 轉基因錦橙中WRKY基因與PR基因相互調節(jié)的表達分析
    4.10 轉基因錦橙的相關表型分析
        4.10.1 轉基因植株表型觀察
        4.10.2 轉基因植株葉面積指數分析
第5章 討論
第6章 結論
參考文獻
附錄 縮略詞表
致謝
發(fā)表文章與參與項目


【參考文獻】：
期刊論文
[1]蘋果WRKY轉錄因子家族基因生物信息學分析[J]. 許瑞瑞,張世忠,曹慧,束懷瑞.  園藝學報. 2012(10)
[2]WRKY轉錄因子的研究概況[J]. 潘園園,徐祥彬,王春玲,馬杰,王慧中.  浙江農業(yè)科學. 2012(02)
[3]柑橘潰瘍病致病基因pthA的克隆及序列分析[J]. 胡春華,鄧子牛.  湖南農業(yè)大學學報(自然科學版). 2008(02)
[4]根癌農桿菌介導柞蠶抗菌肽D基因轉化柑桔的研究[J]. 陳善春,張進仁,黃自然,高峰,陳鳳珍,隆有慶.  中國農業(yè)科學. 1997(03)

博士論文
[1]WRKY轉錄因子SIDRW1和NAC轉錄因子SISRN1在番茄抗性反應中的功能研究[D]. 劉波.浙江大學 2012
[2]煙草PR-1a蛋白的表達、制備及其性質、功能研究[D]. 李佳.四川大學 2007



本文編號：2994401