發(fā)布時間：2021-01-22 18:55

　　以紫花苜蓿的子葉或葉片為外植體,建立高頻體胚發(fā)生及成苗技術體系,為苜蓿耐逆性狀的遺傳改良提供技術支撐。在愈傷誘導、體胚誘導、體胚成熟與萌發(fā)等幾個關鍵環(huán)節(jié),分析比較培養(yǎng)基組分對培養(yǎng)效果的影響。建立在SHDK培養(yǎng)基上誘導愈傷、MB（-/+）+ABA 0.4mg/L+PEG-6000 50g/L+蔗糖50g/L培養(yǎng)基上誘導體胚、Bio2Y培養(yǎng)基上促體胚發(fā)育成熟、1/2 MS（或SH）培養(yǎng)基上體胚萌發(fā)成苗的高頻再生技術體系。最適條件下,每克胚性愈傷組織可產生77.9個正常萌發(fā)成苗的健康體胚。再生植株在生長箱內經過2周20℃、16h/d的光照培養(yǎng)后移栽溫室,成活率達90%以上。利用該離體再生技術成功地將凝集素基因PPA導入苜蓿中,獲得抗蚜轉基因苜蓿。 

【文章來源】：西北農業(yè)學報. 2017,26(06)北大核心

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【部分圖文】：

圖１不同培養(yǎng)基上的體胚誘導效果ａ．ＭＳＢＮ培養(yǎng)基ＭＳＤＮｍｅｄｉｕｍ；ｂ．ＭＳ０培養(yǎng)基ＭＳ０ｍｅｄｉｕｍ；ｃ．ＭＢ（－）培養(yǎng)基ＭＢ（－）

體胚數(shù)也少。ＭＢ（－／＋）培養(yǎng)基［在ＭＢ（－）基礎上ＫＮＯ３加倍］的體胚誘導效果較好，每一塊愈傷組織都有體胚形成，且愈傷組織內部到后期亦有體胚形成；體胚數(shù)量也較其他３個處理明顯增加（圖１－ｄ），每克愈傷組織形成的體胚數(shù)平均為３９．５±６．２。ａ．ＭＳＢＮ培養(yǎng)基ＭＳＤＮｍｅｄｉｕｍ；ｂ．ＭＳ０培養(yǎng)基ＭＳ０ｍｅｄｉｕｍ；ｃ．ＭＢ（－）培養(yǎng)基ＭＢ（－）ｍｅｄｉｕｍ；ｄ．ＭＢ（－／＋）培養(yǎng)基ＭＢ（－／＋）ｍｅｄｉｕｍ圖１不同培養(yǎng)基上的體胚誘導效果Ｆｉｇ．１Ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉａ２．３體胚成熟與萌發(fā)將子葉型胚直接轉移到ＭＳ０或１／２ＭＳ培養(yǎng)基上后，大部分體胚不能正常萌發(fā)成苗。部分胚狀體子葉異常膨大后停止生長，或出現(xiàn)連體的子葉，或出現(xiàn)試管苗的玻璃化，或出現(xiàn)大量次級體胚，不能發(fā)育成完整的植株；有的胚狀體膨大后出現(xiàn)脫分化重新愈傷化現(xiàn)象。據(jù)２個批次試驗的調查統(tǒng)計，體胚正常萌發(fā)成苗的比率僅為５．８％（表２）。針對苜蓿體胚在ＭＳ０或１／２ＭＳ培養(yǎng)基上發(fā)生的玻璃化現(xiàn)象，采取將三角瓶放入光照培養(yǎng)箱以增加光強，提高瓊脂質量濃度以提高培養(yǎng)基滲透壓、降低容器濕度，使用透氣透光好的封口膜降低ＮＨ＋４濃度，添加活性碳等措施，但效果均不明顯。為此，借鑒黎茵等［２２］的方法，添加一個體胚成熟的液體培養(yǎng)過程，即將獲得的體胚放入促進體胚成熟的液體培養(yǎng)基（ＳＨ基本鹽＋Ｌ－Ｐｒｏｌｉｎｅ３．４５ｇ／Ｌ＋（ＮＨ４）２ＳＯ４１．６５ｇ／Ｌ＋蔗糖２０

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2993737