【摘要】：基因表達的精確定量是研究疾病和組織器官發(fā)育相關(guān)分子機制、遺傳功能的基礎(chǔ)。實時定量PCR(qPCR)由于其簡單,特異性好,靈敏度高和可定量范圍寬而被廣泛應(yīng)用于基因表達定量研究。而使用適當?shù)膮⒖蓟蛞源_保精確標準化和定量基因表達尤為重要,例如中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的早期發(fā)育、成熟、衰老到損傷過程的基因表達定量和差異基因的發(fā)現(xiàn)都離不開合適的參考基因選擇。在本研究中,我們在發(fā)育中的小鼠大腦和脊髓中選取了12個候選看家基因(ACTB,CYC1,HMBS,GAPDH,HPRT1,RPL13A,YWHAZ、PPIA、RPLP0,TFRC、GUS和18S rRNA)。在整個CNS發(fā)育過程中,我們發(fā)現(xiàn)它們的表達水平都存在一定程度的波動,這也再次提示了選擇合適的參考基因的重要性和復(fù)雜性。在本研究中,我們使用了BestKeeper,geNorm和NormFinder三套不同的算法來評估備選參照基因的穩(wěn)定性,我們發(fā)現(xiàn)GUS是最穩(wěn)定的基因,而GUS/YWHAB是最穩(wěn)定的參考基因組合。對不同發(fā)育階段(包括損傷階段)及不同腦區(qū),這兩基因相對穩(wěn)定而HPRT1和GAPDH表達波動相對較大不適合用作于CNS發(fā)育研究的參考基因。因此,我們的研究結(jié)果確定了GUS和YWHAZ作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育學表達數(shù)據(jù)的標準化參考基因,同時他們的組合也優(yōu)于其他組合可用于基因的表達定量研究。
【學位授予單位】：杭州師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：Q42
【圖文】：

研究路線：本研究小鼠取樣以及發(fā)育階段示例，不同時期的腦和脊髓組織中ACTB和GAPDH的表達水平用折線圖標出

小鼠大腦，脊髓，小腦和腦干發(fā)育過程中潛在參考基因的整體表達模式：每個參考基因在4種CNS組織樣品中的原始Ct值以箱形圖表示，包括大腦（A），脊髓（B），后腦（C）和腦干（D）

潛在參考基因的個體時空表達模式，通過qPCR測定ACTB（A），HPRT1（B），

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本文編號：2802946