發(fā)布時間：2020-07-02 03:34

【摘要】：維生素D受體(Vitamin D Receptor,VDR)作為核轉錄因子,廣泛分布于多種組織細胞。VDR通過參與AKT、Wnt/β-Catenin及NF-κB等關鍵信號通路,調節(jié)體內鈣鹽離子平衡、抑制細胞增殖以及刺激細胞成熟等生理功能。VDR突變或缺失會引發(fā)睪丸、皮膚、骨骼、乳腺及前列腺等組織發(fā)生病變。本研究前期發(fā)現雄性VDR敲除小鼠生殖能力較低,推測VDR基因敲除影響雄性小鼠的生殖機能。因此,本研究首先采用RNA-seq技術檢測6月齡野生鼠和VDR敲除鼠睪丸組織,初步分析野生鼠和敲除鼠差異表達基因,篩選與雄性生殖機能相關的差異基因,通過qPCR技術驗證其表達水平;其次,從小鼠cDNA文庫中,采用酵母雙雜交技術篩選與VDR互作的蛋白因子,分析其生理功能;結合RNA-seq數據和酵母雙雜交篩選結果,進一步揭示VDR通過直接和間接作用影響雄性小鼠生殖機能的分子機制,為解析VDR的生理功能提供基礎理論數據。本研究主要獲得實驗結果如下:1.與野生鼠比較,VDR敲除鼠的肺、腎、皮膚、小腸、睪丸和胸腺等組織中VDR基因的轉錄表達水平顯著增強,但Western-blot實驗在VDR敲除鼠的皮膚、小腸、腎臟及睪丸等組織中未檢測VDR表達。另外,本研究通過qPCR證明不同組織中受VDR調控的基因CYP24A1轉錄表達水平顯著降低。所有數據說明本實驗用鼠為全身性VDR基因敲除小鼠,VDR敲除后影響了其靶基因的表達,為后續(xù)實驗提供了實驗材料保證。2.分析睪丸轉錄組測序數據,在野生鼠與敲除鼠中共獲得258個差異表達基因,其中上調基因122個,下調基因136個;其中KLK1、KLHL4、Angptl4和Car3等基因與雄性生殖相關,Azgp1和ApoF基因與脂代謝相關,最終通過qPCR進一步驗證。3.通過酵母雙雜交技術從小鼠cDNA文庫中篩選獲得12個與VDR互作的候選蛋白,其中AKAP10、FKBP51蛋白因子可能與VDR結合調控蛋白激酶磷酸化或去磷酸化以影響精子形成、發(fā)育和精子活力等;CYP2J5蛋白可能與VDR結合而調節(jié)睪酮激素代謝或介導其他蛋白因子與VDR結合影響細胞增殖、分化、遷移和運動,甚至脂代謝等相關功能。
【學位授予單位】：陜西理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：Q75
【圖文】：

R 應答元件阻遏基因的表達第Ⅴ及第Ⅵ外顯子編碼）有 13三層夾心結構，36 個氨基酸殘有能與配體連接的氫鍵。AF-2 與，同時AF-2區(qū)的調節(jié)因子可XR 異源二聚體與配體結合后，致 VDR 對某些基因的轉錄激活中性粒細胞和巨噬細胞中對集基因具有轉錄抑制作用[20]。圖 1-1 VDR 結構示意圖1-1 VDR schematic diagram of stru

的組蛋白乙�；D移酶。這一機制主要是調控角質形成細胞的分化，抑制表皮角質形成細胞增殖相關基因的表達（見圖 1-3）。圖1-3 角質形成細胞分化過程VDR輔助激活劑和SRC/P160在轉錄激活選擇性利用模型[26]Fig.1-3 Model Showing Selective Utilization of Two Distinct VDR Coactivators ofDRIP/Mediator and SRC/p160 in Transcriptional Activation during KeratinocyteDifferentiationVDR 即能調控復合物，也參與到維生素 D 的生物合成與降解，進而維持機

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本文編號：2737683