【摘要】：棕櫚酸(Palmitic acid)作為一種飽和脂肪酸,在日常生活中隨處可見,當機體攝入過多棕櫚酸之后,就會將其轉(zhuǎn)化為游離脂肪酸,積累于血液中影響蛋白質(zhì)的合成,從而引起多種代謝疾病的發(fā)生。且有研究發(fā)現(xiàn),過多的脂肪酸后會對細胞中Ca2+運輸產(chǎn)生影響,對于肌漿網(wǎng)(內(nèi)質(zhì)網(wǎng))Ca2+ATP酶(SERCA)的活性有一定的的影響。而在骨骼肌中有研究表明,Sln和s Ank1是SERCA1的重要調(diào)控因子,并且在機體產(chǎn)熱和肌肉收縮耦合中起到很關(guān)鍵的作用。而目前對于過多脂肪酸的攝入與SERCA1的主要調(diào)控因子Sln和s Ank1之間的作用關(guān)系以及兩者之間的機制還有待進一步研究。本研究首先探究了PA是否會激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中未折疊蛋白反應(yīng)(UPR),和PA是否對目的基因Sln和s Ank1基因表達有調(diào)控作用。且接下來分別探究UPR的三條通路(PERK、IRE1和ATF6通路)是否參與到PA調(diào)控Sln和s Ank1基因表達的過程中。對于PERK和IRE1通路的研究,主要采用通路抑制劑和轉(zhuǎn)染干擾片段的方法對該通路進行抑制和阻斷,并且利用q RT-PCR在m RNA水平和利用western blot在蛋白水平檢驗兩條通路的阻斷情況,在阻斷成功的情況下,檢測了Sln和s Ank1基因的表達情況。對于ATF6通路,主要運用的CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建Cas9-ATF6單靶點和雙靶點敲除細胞系,利用敲除細胞系檢測目的基因的表達情況。從而初步確定三條通路是否參與到棕櫚酸誘導(dǎo)的Sln和s Ank1基因的表達過程中。實驗結(jié)果顯示,當PERK通路被阻斷后,PA對Sln基因表達的下調(diào)作用明顯減弱,但對s Ank1基因的下調(diào)作用無明顯的影響。而當IRE1通路被阻斷后,是PA對s Ank1基因表達的下調(diào)作用有明顯減弱。對于ATF6通路敲除細胞系的研究發(fā)現(xiàn),在ATF6的敲除細胞系中PA對Sln和s Ank1基因的影響與普通細胞系中的影響程度基本相同。根據(jù)以上結(jié)果,可以初步確認,PERK通路參與PA調(diào)控Sln基因的表達,IRE1通路參與PA調(diào)控s Ank1基因的表達,而ATF6對于PA調(diào)控兩個基因的表達都沒有什么影響。該研究為過量棕櫚酸對機體的影響貢獻了新的證據(jù),并且為接下來Ca2+穩(wěn)態(tài)和機體代謝平衡的研究提供了新的思路。
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：Q78
【圖文】：

輸?shù)钠羁赡軙䦟】诞a(chǎn)生一定的質(zhì)，但同時缺乏和過量攝入棕櫚酸都基因與 SERCA 的關(guān)系 40％，并具有能力去發(fā)揮的產(chǎn)熱，是產(chǎn)生熱量的良好機制，其中反復(fù)不利的，因此需要用非顫抖來代替網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng) Ca2 +ATP 酶（SERCA）CA）負責將肌鈣蛋白（Ca2+）從胞質(zhì)肉，SERCA 的螯合活性促進了心臟白是一種分子量為 110 kDa 的跨膜蛋部，含有 2 個 Ca2 +結(jié)合位點的跨膜螺要是調(diào)節(jié)肌肉內(nèi) Ca2+處理中的內(nèi)在作肌漿網(wǎng)（SR）腔的轉(zhuǎn)運，運輸機制如 SR 膜在靜息時存在接近 10000 倍的作用占骨骼肌基礎(chǔ)代謝率的大約 40％

了生物學(xué)研究的許多領(lǐng)域[100]。Ebina 等人運用 CRISPR/Cas9 技術(shù)用于治療艾的研究，發(fā)現(xiàn)效果顯著[101]。CRISPR / Cas9 技術(shù)除了在醫(yī)療方面有重大貢獻生物技術(shù)中，精確操作遺傳構(gòu)建模塊和監(jiān)管機構(gòu)也有助于逆向工程或重建有生物系統(tǒng)，例如，增強工業(yè)相關(guān)生物體中的生物燃料生產(chǎn)途徑，或通過創(chuàng)建染作物來提高農(nóng)作物產(chǎn)量等，為我們的生產(chǎn)生活提供了新的思路[98]。有研究顯示 CRISPR / Cas9 是用于多種細胞類型和生物體的基因組工程具，且具有強大的功能，迄今為止，CRISPR / Cas9 已成功應(yīng)用于細菌、酵母蠅、斑馬魚、水稻、猴、小鼠和人類[102]。CRISPR / Cas9 技術(shù)可用于多種生物因功能鑒定，基因敲除/敲低是研究特定基因的生理和病理功能的基本方法，前的研究中最常用的是 RNAi 技術(shù)，主要用于大規(guī)模的基因組篩選，但是技術(shù)有一定的弊端，主要弊端就是它不能完全沉默靶基因的表達，從而對實果有一定的影響[103]。在 2014 年，CRISPR / Cas9 系統(tǒng)已經(jīng)快速發(fā)展成為一項模的功能篩選工具，且已經(jīng)成功應(yīng)用于各種基因組的功能篩選[104]。綜上所CRISPR / Cas9 技術(shù)在對于科學(xué)研究來說是歷史性的突破，同時也得到的飛速展，且在廣泛被使用的同時，科學(xué)家們也在更加努力地優(yōu)化 CRISPR / Cas9 相信在不久的將來，基因組編輯技術(shù)將會有更大的發(fā)展和更可觀的前景。

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本文編號：2724578