【摘要】：本課題選用8981基因為目的基因,通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因轉(zhuǎn)入植物基因組中,本課題主要進行后期鑒定,利用除草劑、PCR、生理篩選、Southern雜交以及Tail-PCR等技術(shù),最終獲得能夠穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因旱稻新品系。具體研究結(jié)果有以下幾點:(1)候選純合株系的篩選在試驗田采用濃度為0.8mg/mL的草銨膦進行噴灑,篩選出97個具有抗除草劑的抗性株系進行PCR鑒定,篩選出候選純合株系93個,雜合株系4個。(2)抗性株系鑒定及突變體篩選將篩選出的93個候選純合株系,通過NaCl脅迫后得到8個比野生型耐鹽性強的株系、PEG脅迫后得到7個比野生型抗旱性強的株系、極限實驗篩選出高抗除草劑的株系93個以及目前最高的除草劑耐受濃度8mg/mL;并獲得了具有特殊農(nóng)藝性狀的矮桿株系6個以及籽粒飽滿的株系33個。(3)Southern雜交分析本實驗采用地高辛試劑盒進行Southern雜交,從25個株系中篩選出了能夠穩(wěn)定遺傳的單拷貝轉(zhuǎn)基因株系2個;二拷貝轉(zhuǎn)基因株系12個;多拷貝轉(zhuǎn)基因株系11個。(4)TAIL-PCR分析目的基因的插入位點將得到的能夠穩(wěn)定遺傳的2個單拷貝轉(zhuǎn)基因株系2-9-5、2-19-5分別進行TAIL-PCR鑒定,確定了株系2-9-5目的基因的插入位點在10號染色體Os10g0351500基因中,此基因編碼Tyrosine protein;株系2-19-5目的基因的插入位點在1號染色體Os01g0884300基因中,此基因編碼NAW protein。
【圖文】：

圖 2-1 質(zhì)粒的提取草劑抗性篩選2 所示，分別表示株系未經(jīng)除草劑噴灑前及經(jīng)除草劑2-7-4、2-8-1 經(jīng) 0.8mg/mL 草銨膦噴灑后 8d，植株WT）對照組植株全部死亡，如圖 2-2 所示，可以表；但是 3-2-1 株系有個別植株葉片出現(xiàn)變黃、干枯、如圖 2-2 所示。

圖 2-1 質(zhì)粒的提取抗除草劑抗性篩選 2-2 所示，分別表示株系未經(jīng)除草劑噴灑前及經(jīng)除草劑噴灑后的生1-3、2-7-4、2-8-1 經(jīng) 0.8mg/mL 草銨膦噴灑后 8d，植株更壯，并無死（WT）對照組植株全部死亡，如圖 2-2 所示，可以表明 2-1-3、2-7系；但是 3-2-1 株系有個別植株葉片出現(xiàn)變黃、干枯、死亡，說明，如圖 2-2 所示。
【學位授予單位】：河北科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S511.6

【參考文獻】

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5 汪斌;劉婷婷;張淑君;蘭濤;官華忠;周元昌;吳為人;;水稻苗期耐鹽突變體的遺傳分析及基因定位[J];遺傳;2013年09期

6 章潔瓊;李紅艷;胡小南;單志慧;唐桂香;;農(nóng)桿菌介導的RNAiCP基因在大豆中的轉(zhuǎn)化[J];作物學報;2013年09期

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8 朱英;劉永翔;黃永會;劉作易;;分子檢測技術(shù)在轉(zhuǎn)基因植物中的研究概況[J];種子;2013年04期

9 向殿軍;滿麗莉;王麗娜;張娣;殷奎德;宋群雁;徐正進;;RsICE1基因表達和轉(zhuǎn)基因水稻抗冷通路研究[J];西北植物學報;2013年03期

10 藍嵐;吳帥;申麗威;王志坤;孟凡立;宋波;拓云;劉珊珊;;根癌農(nóng)桿菌介導大豆轉(zhuǎn)Bt-cryIA抗蟲基因[J];中國油料作物學報;2013年01期

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1 賀海生;抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆抗性鑒定、遺傳分析及回交轉(zhuǎn)育[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2013年

2 徐曉露;嗜酸真菌Bispora sp.MEY-1來源甘露聚糖酶和葡聚糖酶轉(zhuǎn)基因玉米的培育[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2013年

3 郭盈盈;甘藍OguCMS相關(guān)基因全長cDNA的克隆和功能分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2013年

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本文編號：2686242