【摘要】：葡萄霜霉病是嚴重危害葡萄生長的病害之一,葡萄霜霉菌(Plasmopara viticola(Berk.andCurt.)Berl.and de Toni)能分泌Rx LR類效應(yīng)因子到植物細胞體內(nèi)發(fā)生生理生化反應(yīng),從而有效地生長繁殖,導致寄主感病,這些效應(yīng)因子抑制植物免疫反應(yīng),在寄主細胞中發(fā)揮毒性作用。本研究基于前期實驗室對葡萄霜霉菌效應(yīng)分子功能的篩選,從中挑選RxLR31197效應(yīng)分子進行分析。首先克隆了葡萄霜霉菌效應(yīng)因子RxLR31197,構(gòu)建相關(guān)表達載體,進行了RxLR31197的生物信息學分析及表達模式分析,并以小鼠促凋亡蛋白Bax為誘導子,分析了其對Bax誘導的過敏性細胞死亡的抑制作用和誘導煙草細胞死亡的功能,同時對其亞細胞定位分析,再以RxLR31197為誘餌,在中國野生復葉葡萄‘留壩-8’葉片酵母表達cDNA文庫中篩選互作蛋白,酵母回復驗證是否互作,最后穩(wěn)定轉(zhuǎn)化模式植物本氏煙草,對轉(zhuǎn)基因植株進行抗病分析。主要取得以下結(jié)果如下:1.克隆得到葡萄霜霉菌效應(yīng)因子RxLR31197基因的序列長度為411bp,共編輯136個氨基酸。預測蛋白二級結(jié)構(gòu)具有8個α螺旋和1個β折疊,將Rx LR31197蛋白序列與其他已知無毒蛋白進行多序列比對和系統(tǒng)進化樹分析發(fā)現(xiàn)RxLR31197與致病疫霉Avr4的親緣關(guān)系最近,推測RxLR31197可能參與抗病反應(yīng)。2.進行表達模式分析,誘導致死和抑制致死研究和亞細胞定位分析發(fā)現(xiàn):葡萄霜霉菌效應(yīng)因子RxLR31197在侵染早期受誘導上調(diào)表達,可能抑制植物對病原菌識別產(chǎn)生PTI(PAMP-triggered immunity);RxLR31197具有部分抑制Bax引起的PCD能力,亞細胞定位顯示RxLR31197定位在細胞核和細胞質(zhì)上。3.利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選了葡萄霜霉菌效應(yīng)因子RxLR31197在中國野生葡萄中的互作蛋白:(1)Vitis vinifera vesicle-associated protein(2)chaperone protein ClpB3(3)NAC domain-containing protein(4)tRNA deaminase。4.通過煙草穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因株系,并對轉(zhuǎn)基因植株進行抗病功能分析。
【圖文】：

霜霉菌效應(yīng)因子RxLR31197的擴增及PVX載體質(zhì)粒酶切檢測

葡萄霜霉菌效應(yīng)因子RxLR31197的二級結(jié)構(gòu)預測
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S436.631.1

【參考文獻】

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本文編號：2661700