【摘要】：煙曲霉感染免疫力低下者引起侵襲性曲霉病(IA),并成為重癥患者死亡的主要原因之一,然而其發(fā)病機(jī)理和毒力因子還不清楚。內(nèi)醚糖激酶(LGK)是最近發(fā)現(xiàn)的可能與細(xì)胞壁代謝相關(guān)的真菌激酶。研究煙曲霉內(nèi)醚糖激酶基因的生理功能具有重要的科學(xué)意義。生物信息學(xué)分析顯示煙曲霉具有3個(gè)內(nèi)醚糖激酶基因(lgk1、lgk2、lgk3),而弱致病的黃曲霉、黑曲霉,土曲霉和構(gòu)巢曲霉分別具有1到2個(gè)內(nèi)醚糖激酶基因。基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn),煙曲霉內(nèi)醚糖激酶基因組成型表達(dá),除構(gòu)巢曲霉菌外,其它曲霉菌的內(nèi)醚糖激酶基因誘導(dǎo)型表達(dá)。在孢子萌發(fā)生長階段,煙曲霉lgk1大量表達(dá),lgk2,lgk3微弱表達(dá)。在菌絲生長階段,lgk1和lgk2大量表達(dá),lgk3微弱表達(dá)。采用同源重組技術(shù)以及CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除掉煙曲霉lgk1。PCR分別驗(yàn)證基于同源重組技術(shù)構(gòu)建的lgk1缺失菌株ZS1和基于CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建的lgk1缺失菌株ZS2�；驒z測(cè)發(fā)現(xiàn)ZS1和ZS2的lgk1沒有表達(dá)。測(cè)序ZS2菌株的lgk1,證實(shí)lgk1被完全刪除。表型分析顯示在含有內(nèi)醚糖為唯一碳源和能源的基本培養(yǎng)上,ZS2不能生長,ZS1微弱生長。孢子萌發(fā)率檢測(cè)發(fā)現(xiàn)ZS1降低14.50%,ZS2降低23.32%。菌絲生長干重檢測(cè)發(fā)現(xiàn)較ZS1降低6.62%,ZS2降低5.44%。本研究結(jié)果初步表明煙曲霉lgk1與孢子萌發(fā)和菌絲生長相關(guān),是潛在的致病因子。
【圖文】：

煙曲霉侵染人體過程

糖類熱解生成內(nèi)醚糖[27]
【學(xué)位授予單位】：武漢輕工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：Q933

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3 宋s，

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