【摘要】：玉米(Z Mays L.)是喜溫作物,但在我國糧食重要產地的東北地區(qū),由于高緯度原因,造成冷害現(xiàn)象多有發(fā)生,嚴重威脅到我國的糧食安全~([1])。因此開展玉米耐冷相關基因及冷響應機制研究就顯得尤為重要。針對此目的,本研究開展了耐冷基因克隆、功能驗證,及其遺傳轉化的相關研究,為培育玉米新種質新品種奠定基礎。具體研究結果如下:1.根據耐冷玉米自交系W9816蛋白質組學分析結果,克隆冷脅迫下表達上調的蛋白ZmNAP1(玉米核小體組裝蛋白),其片段長度為1292bp。分析表明ZmNAP1編碼370個氨基酸,并發(fā)現(xiàn)ZmNAP1蛋白具有較高的保守性。2.對玉米自交系W9816進行4℃低溫處理,結果表明ZmNAP1基因在根、莖、葉中的表達量不同,對冷脅迫的應答速度不同,但均受冷誘導表達。3.構建了ZmNAP1基因過表達載體pCAMBIA-3301-35s-ZmNAP1,利用農桿菌介導法獲得了T_3代過表達擬南芥株系。4℃低溫萌發(fā)和NaCl處理鑒定該基因功能,結果表明ZmNAP1過表達可以提高擬南芥對冷脅迫及鹽的耐受性,也表現(xiàn)出較高的抗凍性。對脯氨酸含量、POD及SOD活性等生理生化指標測定結果表明,過表達ZmNAP1基因提高了擬南芥植株耐冷性。4.優(yōu)化農桿菌介導轉化體系,侵染前對體細胞胚胎進行高滲培養(yǎng)0h、4h、8h處理,與對照相比,經高滲培養(yǎng)的再生植株陽性率從2.4%升高到6.3%。5.根據玉米轉化體系優(yōu)化條件,ZmNAP1基因過表達載體菌液對玉米自交系Y423進行遺傳轉化,獲得陽性植株共151棵。
【圖文】：

1.3 NAP1 研究進展NAP1(核小體組裝蛋白 1)是組蛋白 H2A-H2B 的分子伴侶。組蛋白分子介導核小體去組裝，在表觀遺傳調控和染色體重塑過程中有重要作用。組分子伴侶在動植物及酵母中都高度保守。 NAP1 通過去除或替換組蛋白 H2B，亦或調節(jié)核小體滑動，進而改變染色質的結構及遺傳代謝功能，以影響細胞的分化及個體發(fā)育過程等[64]。NAP1 從人的 Hela S3 和小鼠 FM3A 細胞中作為一種有利于核小體組裝構而在體外被分離[65][66]，并且被用作體外染色體組裝系統(tǒng)的試劑[67]。NA真核細胞中高度保守，，且同系物存在于酵母[68]、果蠅[69]、線蟲[70]、瘧[71][72]、小鼠和人[66]以及大豆[73]、煙草和水稻[74][75]、擬南芥[75][76]中。NAP1 家

的克隆
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：Q943.2;S513

【參考文獻】

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本文編號：2590309