【摘要】：目的:通過(guò)直腸癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cell,CTC)與原發(fā)腫瘤組織基因表達(dá)譜的差異分析,篩選直腸癌CTC的特異性基因。方法:選取2015年9月至2015年12月福建省腫瘤醫(yī)院收治的直腸癌患者4例,取腫瘤組織和相應(yīng)的癌旁組織并采集外周血20 ml。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血液CTC,抽提癌組織和CTC的總RNA,采用人全轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜芯片檢測(cè)CTC及相應(yīng)腫瘤組織mRNA表達(dá)譜,經(jīng)聚類(lèi)分析篩選CTC特異性基因,并采用生物分子注釋系統(tǒng)MAS軟件對(duì)其進(jìn)行基因功能及其相關(guān)的信號(hào)通路分析。結(jié)果:4例直腸癌患者檢測(cè)到CTC數(shù)目分別是67、78、53和120個(gè)。篩選出腫瘤與癌旁組織差異基因共7 755個(gè)、CTC與白細(xì)胞差異基因共567個(gè),腫瘤組織及CTC差異基因交集后共同上調(diào)或下調(diào)的特異性基因共36個(gè),其中上調(diào)16個(gè)、下調(diào)20個(gè)(P0.05或P0.01)。CTC特異性基因與腫瘤轉(zhuǎn)移和干細(xì)胞功能有關(guān),涉及與細(xì)胞轉(zhuǎn)移、干細(xì)胞功能和免疫功能相關(guān)的22條信號(hào)通路。結(jié)論:CTC與原發(fā)腫瘤基因相比,具有獨(dú)特的表達(dá)譜,是腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的重要基礎(chǔ)。
【圖文】：

tp://bioinfo．capitalbio．com/mas3/)軟件進(jìn)行GO(GeneOntology)分析，其中MAS系統(tǒng)包括3個(gè)公共數(shù)據(jù)庫(kù):MolecularFunction、BiologicalProcess和CellularComponent，從而探討差異基因的功能以及可能涉及的相關(guān)信號(hào)通路。1．7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，兩組數(shù)據(jù)比較采用非配對(duì)t檢驗(yàn)，以P＜0．05或P＜0．01表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2．1成功檢測(cè)出直腸癌CTC入選病例一般資料及檢測(cè)CTC數(shù)見(jiàn)表1。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CTC(DAPI+/CD45/Epcam+)和白細(xì)胞對(duì)照(DAPI+/CD45－/Epcam－)見(jiàn)圖1，4例患者檢測(cè)出CTC數(shù)量為53～120個(gè)。表1入選病例一般資料和分選CTC個(gè)數(shù)Tab．1ClinicalfeaturesandsortedCTCnumberofthe4patientswithrectalcancerNo．SexAge(t/a)PathologicaltypeGradingandStaging(WHO2010)CTCnumber1Male44ModeratelydifferentiatedulcerativeadenocarcinomaofrectumpT3N1M0，ⅢB672Male59SameasabovepT3N0M0，ⅡA783Female60SameasabovepT2N0M0，Ⅰ534Female66SameasabovepT2N1cM0，ⅢA120圖1流式細(xì)胞儀檢測(cè)和分選CTCFig．1IdentificationandsortingofCTCsbyflowcytometry2．2直腸癌組織及血液CTC中部分基因表達(dá)明顯上調(diào)或下調(diào)2．2．1腫瘤組織及血液CTC基因芯片散點(diǎn)分布散點(diǎn)圖(圖2)中腫瘤組織用T表示，癌旁正常組織用N表示，CTC用C表示，白細(xì)胞用W表示。散點(diǎn)圖分別展示了T/N和C/W樣品之間基因表達(dá)的差異情況。其中X軸和Y軸分別以熒光信號(hào)強(qiáng)度為坐標(biāo)，圖中每個(gè)點(diǎn)代表芯片上一個(gè)探針集(基因)的熒光信號(hào)強(qiáng)度，其中標(biāo)注為紅色的分別是T/N和C/W發(fā)生上調(diào)的基因，標(biāo)注為綠色的是T/N和C/W發(fā)生下調(diào)的基因，標(biāo)注為黑色的是表達(dá)無(wú)差異基因。A:Ｒectalcarcinomaandnormalintestinaltis

sandsortedCTCnumberofthe4patientswithrectalcancerNo．SexAge(t/a)PathologicaltypeGradingandStaging(WHO2010)CTCnumber1Male44ModeratelydifferentiatedulcerativeadenocarcinomaofrectumpT3N1M0，ⅢB672Male59SameasabovepT3N0M0，ⅡA783Female60SameasabovepT2N0M0，Ⅰ534Female66SameasabovepT2N1cM0，ⅢA120圖1流式細(xì)胞儀檢測(cè)和分選CTCFig．1IdentificationandsortingofCTCsbyflowcytometry2．2直腸癌組織及血液CTC中部分基因表達(dá)明顯上調(diào)或下調(diào)2．2．1腫瘤組織及血液CTC基因芯片散點(diǎn)分布散點(diǎn)圖(圖2)中腫瘤組織用T表示，癌旁正常組織用N表示，CTC用C表示，，白細(xì)胞用W表示。散點(diǎn)圖分別展示了T/N和C/W樣品之間基因表達(dá)的差異情況。其中X軸和Y軸分別以熒光信號(hào)強(qiáng)度為坐標(biāo)，圖中每個(gè)點(diǎn)代表芯片上一個(gè)探針集(基因)的熒光信號(hào)強(qiáng)度，其中標(biāo)注為紅色的分別是T/N和C/W發(fā)生上調(diào)的基因，標(biāo)注為綠色的是T/N和C/W發(fā)生下調(diào)的基因，標(biāo)注為黑色的是表達(dá)無(wú)差異基因。A:Ｒectalcarcinomaandnormalintestinaltissues(T/N);B:CTCsandwhitecells(C/W)圖2直腸癌組織與血液CTC細(xì)胞表達(dá)譜散點(diǎn)圖Fig．2ScatterplotofbothrectalcancertissuesandbloodCTCsexpressionprofile2．2．2聚類(lèi)分析顯示直腸癌組織與CTC的基因表達(dá)譜差異較大根據(jù)4例樣品表達(dá)模式的相關(guān)性用Cluster3．0軟件進(jìn)行聚類(lèi)分析，TreeView繪制聚類(lèi)圖(圖3)。直腸癌組織與正常腸組織、CTC與白細(xì)胞各組之間均聚類(lèi)良好;組織(T和N)與細(xì)胞(C和W)這兩大組的表達(dá)譜差異很大，大于單獨(dú)T/N或·350·
【作者單位】： 福建醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院福建省腫瘤醫(yī)院國(guó)家臨床重點(diǎn)腫瘤專(zhuān)科福建省腫瘤生物治療重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：福建省醫(yī)學(xué)創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目(No.2015-CXB-4) 福建省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.2016J01436) 國(guó)家臨床重點(diǎn)專(zhuān)科建設(shè)基金資助項(xiàng)目(No.2015-544)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R730.231;;R735.3

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本文編號(hào)：2530150