本文關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌介導(dǎo)大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展及轉(zhuǎn)基因作物現(xiàn)狀，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《山西大學(xué)》 2011年

植物非組培轉(zhuǎn)化方法獲得轉(zhuǎn)基因植株

張婷婷  

【摘要】：植物基因遺傳轉(zhuǎn)化最常用的方法農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法已經(jīng)使轉(zhuǎn)基因作物的研究與開(kāi)發(fā)取得了舉世矚目的成就。但這些方法依賴于組織培養(yǎng),操作復(fù)雜,所用儀器昂貴,對(duì)操作者和實(shí)驗(yàn)設(shè)備都有很高的要求,難與常規(guī)育種相結(jié)合,因此植物非組培轉(zhuǎn)化方法的研究具有重要意義。本研究采用超聲波輔助花粉介導(dǎo)植物轉(zhuǎn)基因方法將抗逆性相關(guān)受體類蛋白基因(OsSIK1)導(dǎo)入不同品種玉米白交系,以期獲得對(duì)鹽堿性、干旱具有一定程度抗性的轉(zhuǎn)基因玉米材料,同時(shí)研究該方法在不同品種間轉(zhuǎn)化率差異。此外,本研究還采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物萌發(fā)種子基因轉(zhuǎn)化法,以大豆萌發(fā)種子為外源基因受體,將含有crylAc抗蟲(chóng)基因的表達(dá)載體導(dǎo)入大豆中,以探討該方法在大豆上的可行性,并根據(jù)大豆的具體情況對(duì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中的乙酰丁香酮濃度、超聲波功率等因素進(jìn)行試驗(yàn),建立了適合于大豆的遺傳轉(zhuǎn)化體系。研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下： 1.花粉介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化玉米 (1)采用超聲波輔助的花粉介導(dǎo)法,將含有OsSIK1基因的植物表達(dá)載體導(dǎo)入鄭58,98-2-19,昌7-2三個(gè)玉米自交系品種中,在當(dāng)代直接得到了T0代轉(zhuǎn)化種子,其中鄭58結(jié)籽272粒(結(jié)實(shí)率63.4%),98-2-19結(jié)籽27粒(結(jié)實(shí)率14.1%),昌7-2結(jié)籽167粒(結(jié)實(shí)率31.2%)。 (2)T1代植株經(jīng)卡那霉素篩選和PCR檢測(cè),最終得到的轉(zhuǎn)化植株數(shù)為：鄭58,35株(轉(zhuǎn)化率28.5%)：98-2-19,4株(轉(zhuǎn)化率20.0%)：昌7-2,20株(轉(zhuǎn)化率37.1%),初步外源基因已整合到玉米基因組中。 (3)T2代植株遺傳率為：鄭58,34.3%；98-2-19,12.5%；昌7-2,55.0%。通過(guò)對(duì)這3個(gè)自交系的轉(zhuǎn)化處理結(jié)實(shí)率、轉(zhuǎn)化率和導(dǎo)入基因遺傳率的比較分析,證明花粉介導(dǎo)法對(duì)不同自交系品種的轉(zhuǎn)化率間存在差異,自交系鄭58,昌7-2更適合采用花粉介導(dǎo)法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。 2.植物萌發(fā)種子基因轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化大豆 (1)采用超聲波輔助的植物萌發(fā)種子基因轉(zhuǎn)化法,以大豆萌發(fā)種子為外源基因受體,將含有bar基因及cry1Ac基因的表達(dá)載體p3301ubiAc導(dǎo)入大豆中,通過(guò)除草劑篩選、PCR檢測(cè),證明轉(zhuǎn)化率平均為6.9%。 (2)優(yōu)化大豆轉(zhuǎn)化體系：研究了乙酰丁香酮濃度、超聲波功率等因素對(duì)大豆轉(zhuǎn)化效率的影響,并確定了幼苗期噴施除草劑的本底篩選濃度。結(jié)果表明,當(dāng)轉(zhuǎn)化的菌液濃度OD600為0.5～0.6,乙酰丁香酮的濃度為100μmol/L,超聲波功率為800W時(shí)轉(zhuǎn)化效率較高。 (3)用草丁膦濃度分別為1mg/L、1.5mg/L、2mg/L、3mg/L及5 mg/L的除草劑涂抹葉片,根據(jù)幼苗生長(zhǎng)狀態(tài)確定最佳的除草劑篩選濃度為1.5mg/L。在三葉期使用1.5mg/L的除草劑濃度進(jìn)行篩選,可以淘汰大量非轉(zhuǎn)基因和表達(dá)較弱的株系或個(gè)體,大大減少田間工作量及后期檢測(cè)工作。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：Q943.2
【目錄】：

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中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 本報(bào)記者 李江武 通訊員 呂根有;[N];河南科技報(bào);2010年

2 重慶市農(nóng)作物品種審定委員會(huì);[N];農(nóng)資導(dǎo)報(bào);2006年

3 馮國(guó)民;[N];山東科技報(bào);2006年

4 農(nóng)薊彌;[N];農(nóng)資導(dǎo)報(bào);2007年

5 三北種業(yè)有限公司鄭州分公司技術(shù)部;[N];河南科技報(bào);2009年

6 靳生平;[N];塔城日?qǐng)?bào);2010年

7 通訊員 師洪飛;[N];農(nóng)資導(dǎo)報(bào);2007年

8 省農(nóng)業(yè)廳種子管理站 蔡義東 供稿;[N];湖南科技報(bào);2008年

9 本報(bào)記者 王立忠;[N];鐵嶺日?qǐng)?bào);2010年

10 董志水;[N];河北農(nóng)民報(bào);2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王曉東;我國(guó)北方玉米品種及自交系更替過(guò)程中產(chǎn)量和生理特性的演進(jìn)[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

2 慈曉科;我國(guó)不同年代玉米品種及其親本自交系的演變規(guī)律[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 王曉磊;低鉀下不同耐性玉米鉀素積累及其延緩衰老的生理特性[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

4 孫琦;我國(guó)不同年代主推玉米品種耐旱抗病性的變化趨勢(shì)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

5 王立秋;基于分子標(biāo)記輔助選擇的玉米導(dǎo)入系群體構(gòu)建與自交系改良[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 李鳳海;玉米抗旱性指標(biāo)的篩選及其遺傳特性研究[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 于曉芳;玉米葉片水分利用效率及其相關(guān)性狀的QTL定位與分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 李莉;玉米絲黑穗病抗性種質(zhì)創(chuàng)制與選擇[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

9 孟昭東;玉米結(jié)實(shí)習(xí)性遺傳規(guī)律及其在育種中的應(yīng)用[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 鄭洪建;玉米葉片保綠性遺傳分析和QTL定位[D];上海交通大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊利;高淀粉玉米自交系淀粉合成生理基礎(chǔ)及雜種優(yōu)勢(shì)研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 文迪;玉米淀粉分解酶活性動(dòng)態(tài)以及其相關(guān)基因時(shí)空表達(dá)分析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 張婷婷;植物非組培轉(zhuǎn)化方法獲得轉(zhuǎn)基因植株[D];山西大學(xué);2011年

4 杜錦;鹽脅迫下不同基因型玉米的生物學(xué)特性及其遺傳規(guī)律的研究[D];天津農(nóng)學(xué)院;2010年

5 張慧杰;玉米再生體系的建立及SsBHMT基因遺傳轉(zhuǎn)化的初步研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 楊樹(shù)華;石竹自交系的初步選育與花藥培養(yǎng)的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

7 王光達(dá);不同玉米品種抗病性與相關(guān)酶活性的研究[D];延邊大學(xué);2010年

8 陳巖;玉米品種抗旱篩選及不同基因型差異性分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

9 許明陸;武陵山區(qū)玉米自交系的遺傳特性與育種潛力的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2000年

10 張亞麗;利用SSR分子標(biāo)記研究引進(jìn)南斯拉夫玉米自交系的遺傳基礎(chǔ)及雜種優(yōu)勢(shì)預(yù)測(cè)[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

  本文關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌介導(dǎo)大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展及轉(zhuǎn)基因作物現(xiàn)狀，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：215715