本文選題：皮膚 + 增生性瘢痕�。� 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:建立巴馬小型豬背部皮膚瘢痕模型,利用表達(dá)譜基因芯片技術(shù),篩選巴馬小型豬皮膚瘢痕組織與正常皮膚組織差異表達(dá)的相關(guān)基因及通路,選取感興趣的差異基因,驗(yàn)證芯片的結(jié)果,探討其在瘢痕形成過程中可能的作用。方法:取6只健康巴馬小型豬,在背部兩側(cè)制備創(chuàng)面,左右兩側(cè)分別對稱性制備6~8塊創(chuàng)面,大小均為3×3 cm。背部右側(cè)燙傷創(chuàng)面的制備,使用特制燙傷儀制備燒傷創(chuàng)面,將燙傷儀燙頭溫度設(shè)定為100℃,燙頭接觸時(shí)間為20秒;背部左側(cè)采用手術(shù)刀切割方式切取非全厚皮片,將創(chuàng)面所揭除的皮片作為正常皮膚標(biāo)本保存進(jìn)入后續(xù)實(shí)驗(yàn),制備的創(chuàng)面止血處理后,暴露待其自然愈合,觀察創(chuàng)面愈合情況;建模第21天、56天分別從動(dòng)物背部皮膚創(chuàng)面組織中央部位采集創(chuàng)傷愈合及瘢痕組織標(biāo)本。常規(guī)切片染色行形態(tài)學(xué)觀察,提取正常皮膚與切割傷和燒燙傷的第56天瘢痕組織的總RNA并合成雙鏈cDNA,體外轉(zhuǎn)錄合成生物素標(biāo)記cRNA,與Affymetrix公司的GeneChip?Porcine Genome Array表達(dá)譜芯片進(jìn)行雜交,分析篩選出瘢痕組織的差異表達(dá)基因,GO功能富集分析法對差異表達(dá)基因進(jìn)行分析,KEGG通路分析了解兩者的差異。根據(jù)生物信息學(xué)選取KEGG通路分析富集的Hippo信號通路中部分有代表意義的基因通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和免疫組織化學(xué)法做功能驗(yàn)證。結(jié)果:1、大體觀察:建模第56天觀創(chuàng)面,中央可見增生組織,凸出豬背部皮膚表面,呈條索狀,質(zhì)韌;HE染色鏡下見真皮乳頭消失,膠原纖維增多,提示建模成功。2、表達(dá)譜芯片結(jié)果數(shù)據(jù)分析:第56天巴馬小型豬背部皮膚瘢痕與正常皮膚組織相比,共篩選出897個(gè)差異表達(dá)基因,其中234個(gè)表達(dá)上調(diào),663個(gè)表達(dá)下調(diào)。3、GO功能分析結(jié)果顯示,主要參與皮膚發(fā)育、表皮細(xì)胞分化、負(fù)調(diào)節(jié)代謝過程等生物過程,大部分基因位于細(xì)胞連接、離子通道復(fù)合物、多聚核糖體等細(xì)胞成分中,涉及金屬酶、淀粉酶活性的調(diào)節(jié)等分子功能。4、KEGG通路分析結(jié)果顯示差異基因顯著富集于15個(gè)通路,主要涉及Hippo信號通路,TGF-β信號通路、花生四烯酸代謝、氨基酸的代謝等通路。5、實(shí)時(shí)熒光PCR結(jié)果顯示:與正常皮膚相比,第56天瘢痕組織中CTGF、BMP-7、ID1、CDH1的mRNA表達(dá)均有差異(P0.05),且與基因芯片結(jié)果一致,CTGF mRNA表達(dá)呈上調(diào)趨勢,BMP-7、ID1、CDH1的mRNA表達(dá)呈下調(diào)趨勢,驗(yàn)證了基因芯片檢測結(jié)果。6、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:與正常皮膚相比,第56天瘢痕組織中CTGF和BMP-7的蛋白表達(dá)有顯著差異(P0.05),CTGF表達(dá)呈上調(diào)趨勢,BMP-7表達(dá)呈下調(diào)趨勢。結(jié)論:本研究構(gòu)建了巴馬小型豬皮膚瘢痕基因表達(dá)譜,篩選出與正常皮膚差異表達(dá)的基因,涉及大量基因和多個(gè)通路,其中Hippo信號通路和TGF-β信號通路可能與皮膚瘢痕的形成有關(guān),CTGF、BMP-7可能在皮膚瘢痕的形成中發(fā)揮作用。
[Abstract]:Objective: to establish a skin scar model of Bama miniature pig and to screen the differentially expressed genes and pathways between skin scar tissue and normal skin tissue of Bama miniature pig by gene chip technique, and to select the differentially expressed genes. To verify the results of the chip and to explore its possible role in scar formation. Methods: six healthy Bama miniature pigs were used to prepare wounds on both sides of the back, and 68 wounds were prepared symmetrically on both sides of the back. The size of each wound was 3 脳 3 cm. The preparation of scalding wounds on the right side of the back, the use of a specially made scalding instrument to prepare the burn wounds, the scalding temperature is set at 100 鈩，

本文編號：2026255