本文選題：番茄 + SlHin��； 參考：《中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)》2017年07期

【摘要】：【目的】克隆番茄抗性相關(guān)基因Sl Hin1(harpin-induced gene 1),分析其生物信息學(xué)特征、組織表達(dá)和亞細(xì)胞定位情況,研究其在抗煙草花葉病毒侵染、移動(dòng)中的作用,為番茄抗性育種提供理論依據(jù)�！痉椒ā客ㄟ^(guò)RT-PCR及基因克隆方法,從番茄總RNA中克隆得到基因SlHin1;應(yīng)用生物信息學(xué)方法分析其DNA序列及其編碼的蛋白序列特性,使用MEGA6.0對(duì)SlHIN1氨基酸序列及其同源序列進(jìn)行多序列比對(duì),并構(gòu)建同源物種間系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù);將該基因片段通過(guò)Sal Ⅰ和Bam HI雙酶切連接至熒光表達(dá)載體pCV-m GFP-C1,采用GFP標(biāo)記的方法進(jìn)行亞細(xì)胞定位檢測(cè),分析編碼蛋白表達(dá)位置;利用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR(qRT-PCR)分析該基因在番茄不同組織的表達(dá)量水平;將該基因片段通過(guò)Nco Ⅰ和Bam HI通過(guò)雙酶切連接至植物表達(dá)載體pFGC5941,用土壤農(nóng)桿菌EHA105瞬時(shí)過(guò)表達(dá)該基因并接種標(biāo)記有綠色熒光的煙草花葉病毒侵染性克隆,以檢測(cè)植株對(duì)病毒的抗性變化,間接ELISA法檢測(cè)病毒的含量,探究該基因的抗病毒功能。Western blot驗(yàn)證SlHIN1蛋白在本氏煙內(nèi)的表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】利用RT-PCR方法從番茄材料(Solanum lycopersicon cv.Ailsa Craig)的葉片組織中克隆得到全長(zhǎng)為675 bp的番茄抗性相關(guān)基因Sl Hin1,將序列分別提交至Gen Bank,得到序列號(hào)KU195820。序列比對(duì)及生物信息學(xué)分析表明,其基因預(yù)測(cè)編碼225個(gè)氨基酸,分子量為26.1 k D,理論等電點(diǎn)為9.35,結(jié)構(gòu)上具有LEA-14保守結(jié)構(gòu)域,不具有跨膜區(qū)段,并且位于番茄基因組10號(hào)染色體上(Solyc10g081980);多序列比對(duì)及進(jìn)化樹(shù)分析表明,該基因編碼的蛋白與茄科植物HIN1氨基酸同源性80.0%以上而與水稻、高粱單子葉植物的親緣關(guān)系較遠(yuǎn);亞細(xì)胞定位顯示定位在細(xì)胞膜上與PSORT Prediction預(yù)測(cè)的亞細(xì)胞定位最高概率一致;qRT-PCR結(jié)果分析表明該基因具有組織特異性,表達(dá)量在根、葉、莖間依次降低;在本氏煙中瞬時(shí)過(guò)表達(dá)SlHIN1并在表達(dá)部位接種標(biāo)記有綠色熒光的煙草花葉病毒侵染性克隆,處理組本氏煙在接種病毒4 d后沒(méi)有任何熒光出現(xiàn),而對(duì)照組出現(xiàn)綠色熒光。隨著接種時(shí)間推移,接種7 d后處理組葉片上零星熒光有略微的擴(kuò)大,而對(duì)照組的綠色熒光已經(jīng)擴(kuò)散至心葉。間接ELISA檢測(cè)病毒含量較對(duì)照組少,處理組的病毒擴(kuò)散受到抑制。Western blot分析結(jié)果表明,顯色后的硝酸纖維素膜上約在26 k D處有一特異條帶,而空載體的對(duì)照無(wú)相應(yīng)條帶,說(shuō)明SlHIN1蛋白在注射部位成功表達(dá)。【結(jié)論】Hin1在供試科植物中均存在,其中SlHin1定位在細(xì)胞膜,過(guò)表達(dá)該基因可抑制病毒擴(kuò)散,推測(cè)其可能參與茄科植物對(duì)煙草花葉病毒的抗性反應(yīng),使植株獲得抗性。
[Abstract]:[objective] to clone the resistance-related gene Sl Hin1harpin-induced gene 1, analyze its bioinformatics characteristics, tissue expression and subcellular localization, and study its role in resistance to tobacco mosaic virus infection and migration. [methods] the gene SlHin1 was cloned from tomato total RNA by RT-PCR and gene cloning, and its DNA sequence and protein sequence were analyzed by bioinformatics. The amino acid sequences of SlHIN1 and their homologous sequences were aligned with MEGA 6.0, and phylogenetic tree was constructed among homologous species. The gene fragment was digested by Sal 鈪，

本文編號(hào)：2016297